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sdwq

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】有关外切酶的一个问题已有3人参与

DNA双链结构,如果3‘端修饰荧光基团后,外切酶是否还可以起作用?
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mamjun

金虫 (小有名气)


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顶,同问Taq酶能外切3‘端修饰的核酸链吗?
2楼2011-07-21 08:00:16
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bdchengli

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-22 12:00:18
能切,我一直都是用切口酶切修饰的链做实验的,实验很正常
3楼2011-07-22 10:56:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+4): 专家好厉害哈 2011-07-22 12:00:31
引用回帖:
Originally posted by mamjun at 2011-07-21 08:00:16:
顶,同问Taq酶能外切3‘端修饰的核酸链吗?

Taq酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性,缺少3′→5′的外切酶活性。
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4楼2011-07-22 11:10:05
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bdchengli

木虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-22 11:10:05:
Taq酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性,缺少3′→5′的外切酶活性。

我一直不知道这个5′→3′聚合酶活性,5′→3′外切酶活性和3′→5′的外切酶活性是什么意思,只是见到说明书上有,能给我解释下不
5楼2011-07-22 16:41:59
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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西瓜(金币+5, EPI+1): 专业 2011-07-22 17:11:42
引用回帖:
Originally posted by bdchengli at 2011-07-22 16:41:59:
我一直不知道这个5′→3′聚合酶活性,5′→3′外切酶活性和3′→5′的外切酶活性是什么意思,只是见到说明书上有,能给我解释下不

DNA链的扩增都是从5‘→3′,所以现在做PCR用的所有的聚合酶都有5‘→3′聚合酶活性;外切酶的作用是对DNA链进行突变修复,一般酶都有5′→3′外切酶活性,即这种酶可以从DNA链的5’端切下碱基;而具有保真性能的聚合酶才有3′→5′的外切酶活性,当新链扩增过程中,一旦发生了错配,在酶自身3′→5′的外切酶的作用下就会立刻把新产生的错配碱基剪切掉,然后依照模板,连上正确配对的碱基。Taq酶由于没有3′→5′的外切酶的活性所以他扩增的片段错配率比高保真的要高很多
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6楼2011-07-22 16:57:59
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