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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关外切酶的一个问题
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sdwq

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】有关外切酶的一个问题 已有3人参与

DNA双链结构，如果3‘端修饰荧光基团后，外切酶是否还可以起作用？
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1楼 2011-03-11 16:08:42
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mamjun

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
顶，同问Taq酶能外切3‘端修饰的核酸链吗？
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2楼2011-07-21 08:00:16
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bdchengli

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-07-22 12:00:18
能切，我一直都是用切口酶切修饰的链做实验的，实验很正常
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3楼2011-07-22 10:56:32
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): 专家好厉害哈 2011-07-22 12:00:31
引用回帖:
Originally posted by mamjun at 2011-07-21 08:00:16:
顶，同问Taq酶能外切3‘端修饰的核酸链吗？

Taq酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性。
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4楼2011-07-22 11:10:05
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bdchengli

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-07-22 11:10:05:
Taq酶只有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′的外切酶活性，缺少3′→5′的外切酶活性。

我一直不知道这个5′→3′聚合酶活性，5′→3′外切酶活性和3′→5′的外切酶活性是什么意思，只是见到说明书上有，能给我解释下不
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5楼2011-07-22 16:41:59
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 专业 2011-07-22 17:11:42
引用回帖:
Originally posted by bdchengli at 2011-07-22 16:41:59:
我一直不知道这个5′→3′聚合酶活性，5′→3′外切酶活性和3′→5′的外切酶活性是什么意思，只是见到说明书上有，能给我解释下不

DNA链的扩增都是从5‘→3′，所以现在做PCR用的所有的聚合酶都有5‘→3′聚合酶活性；外切酶的作用是对DNA链进行突变修复，一般酶都有5′→3′外切酶活性，即这种酶可以从DNA链的5’端切下碱基；而具有保真性能的聚合酶才有3′→5′的外切酶活性，当新链扩增过程中，一旦发生了错配，在酶自身3′→5′的外切酶的作用下就会立刻把新产生的错配碱基剪切掉，然后依照模板，连上正确配对的碱基。Taq酶由于没有3′→5′的外切酶的活性所以他扩增的片段错配率比高保真的要高很多
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6楼2011-07-22 16:57:59
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