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xiwang88

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[交流] 【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法，请赐教。已有9人参与

第一次摸索毕赤酵母表达。用的是丁香园的毕赤酵母表达实验手册。做到表达那步。选用BMGY BMMY培养基表达。
关于此两种培养基的配制方法。网上查询配方：

BMGY/BMMY：2%蛋白胨，1%酵母提取物，100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)，1.34% YNB，4×10-5 生物素，1%甘油/0.5%甲醇。

这个100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)要怎样达到呢？

按网上某前辈的方法

酵母提取物 10g/L
   蛋白胨    20g/L
      K2HPO4    3g/L
      KH2PO4       11.8G/L
      超纯水    895Ml
      YNB             13.4g/L

121摄氏度灭菌后，培养基是浑浊的。无法使用啊。

所以想问问这两种培养基，各位的配制方法是怎样的呢？赐教吧。新人一个，连个培养基都不会配~~~~~帮帮我吧。

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1楼 2011-03-03 15:22:16

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susizheng

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*BMGY  （Buffered Glycerol-complex Medium ）1L
BMMY  （Buffered Methanol-complex Medium）1L
1%酵母浸出物，2%蛋白胨，100 mM磷酸钾 PH6.0， 1.34% YNB  4×10-5%生物素，1%甘油或 0.5%甲醇
1）溶解 10 g 酵母浸出物，20 g 蛋白胨于700 ml 水中
2）灭菌 20 min
3）冷至室温，加入下列混合液：
100 ml 1M 磷酸钾缓冲液  PH6.0
100 ml 10×YNB
2 ml 500×B
100 ml 10×GY
4）制 BMMY 时，加入 100ml 10×M 取代 10×GY
5）存于 4 度，可放 2 个月
贮存液：
*10×YNB（13.4%酵母氮源碱（YNB）含硫酸铵不含氨基酸）
溶解134 gYNB 于1000 ml水中，过滤除菌，加热至 YNB 完全溶解，存于 4 度。或者用34 gYNB（不含硫酸铵不含氨基酸），100 g  硫酸铵进行配制，可放 1 年。注意毕赤酵母在高浓度 YNB 下生长更好。该试剂盒中所用 YNB 的量是酿酒酵母中的两倍。
*500×生物素（0.02%）
溶解 20 mg 生物素于 100 ml 水中，过滤除菌，放于 4度，可放 1 年
*10×M（5%甲醇）
混合 5 ml 甲醇与 95 ml 水，过滤除菌存于4度，可放2个月
*10×GY（10%甘油）
混合 100 ml 甘油与 900 ml 水，过滤或高压灭菌，室温放置，可存放 1 年以上
*1 M 磷酸钾缓冲液  PH6.0
132 ml  1 M  K2HPO4，868 ml 1 M  KH2PO4，调整 PH 值为 6.0±0.1（如果需调 PH 值，用磷酸或 KOH）。过滤或高压灭菌，室温下可放 1 年以上

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Thank-you，so-blue.

7楼2011-03-03 21:02:13

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