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【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法，请赐教。 已有9人参与
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第一次摸索毕赤酵母表达。用的是丁香园 的毕赤酵母表达实验手册。做到表达那步。选用BMGY BMMY培养基表达。 关于此两种培养基的配制方法。网上查询配方： BMGY/BMMY：2%蛋白胨，1%酵母提取物，100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)，1.34% YNB，4×10-5 生物素，1%甘油/0.5%甲醇。 这个100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)要怎样达到呢？ 按网上某前辈的方法 酵母提取物 10g/L 蛋白胨 20g/L K2HPO4 3g/L KH2PO4 11.8G/L 超纯水 895Ml YNB 13.4g/L 121摄氏度灭菌后，培养基是浑浊的。无法使用啊。 所以想问问这两种培养基，各位的配制方法是怎样的呢？赐教吧。新人一个，连个培养基都不会配~~~~~帮帮我吧。 |
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*BMGY （Buffered Glycerol-complex Medium ）1L BMMY （Buffered Methanol-complex Medium）1L 1%酵母浸出物，2%蛋白胨，100 mM磷酸钾 PH6.0， 1.34% YNB 4×10-5%生物素，1%甘油或 0.5%甲醇 1）溶解 10 g 酵母浸出物，20 g 蛋白胨于700 ml 水中 2）灭菌 20 min 3）冷至室温，加入下列混合液： 100 ml 1M 磷酸钾缓冲液 PH6.0 100 ml 10×YNB 2 ml 500×B 100 ml 10×GY 4）制 BMMY 时，加入 100ml 10×M 取代 10×GY 5）存于 4 度，可放 2 个月 贮存液： *10×YNB（13.4%酵母氮源碱（YNB）含硫酸铵不含氨基酸） 溶解134 gYNB 于1000 ml水中，过滤除菌，加热至 YNB 完全溶解，存于 4 度。或者用34 gYNB（不含硫酸铵不含氨基酸），100 g 硫酸铵进行配制，可放 1 年。注意毕赤酵母在高浓度 YNB 下生长更好。该试剂盒中所用 YNB 的量是酿酒酵母中的两倍。 *500×生物素（0.02%） 溶解 20 mg 生物素于 100 ml 水中，过滤除菌，放于 4度，可放 1 年 *10×M（5%甲醇） 混合 5 ml 甲醇与 95 ml 水，过滤除菌存于4度，可放2个月 *10×GY（10%甘油） 混合 100 ml 甘油与 900 ml 水，过滤或高压灭菌，室温放置，可存放 1 年以上 *1 M 磷酸钾缓冲液 PH6.0 132 ml 1 M K2HPO4，868 ml 1 M KH2PO4，调整 PH 值为 6.0±0.1（如果需调 PH 值，用磷酸或 KOH）。过滤或高压灭菌，室温下可放 1 年以上 |
7楼2011-03-03 21:02:13
姜大磊
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