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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法，请赐教。
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xiwang88

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法，请赐教。 已有9人参与

第一次摸索毕赤酵母表达。用的是丁香园 的毕赤酵母表达实验手册。做到表达那步。选用BMGY BMMY培养基表达。
关于此两种培养基的配制方法。网上查询配方：

BMGY/BMMY：2%蛋白胨，1%酵母提取物，100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)，1.34% YNB，4×10-5 生物素，1%甘油/0.5%甲醇。


这个100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)要怎样达到呢？

按网上某前辈的方法

酵母提取物   10g/L
       蛋白胨      20g/L
        K2HPO4       3g/L
        KH2PO4         11.8G/L
        超纯水      895Ml
        YNB              13.4g/L

121摄氏度灭菌后，培养基是浑浊的。无法使用啊。

所以想问问这两种培养基，各位的配制方法是怎样的呢？赐教吧。新人一个，连个培养基都不会配~~~~~帮帮我吧。
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1楼 2011-03-03 15:22:16
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 21:58:32
*BMGY  （Buffered Glycerol-complex Medium ）1L
BMMY  （Buffered Methanol-complex Medium）1L
1%酵母浸出物，2%蛋白胨，100 mM磷酸钾 PH6.0， 1.34% YNB  4×10-5%生物素，1%甘油或 0.5%甲醇
1）溶解 10 g 酵母浸出物，20 g 蛋白胨于700 ml 水中
2）灭菌 20 min
3）冷至室温，加入下列混合液：
100 ml 1M 磷酸钾缓冲液  PH6.0
100 ml 10×YNB
2 ml 500×B
100 ml 10×GY
4）制 BMMY 时，加入 100ml 10×M 取代 10×GY
5）存于 4 度，可放 2 个月
贮存液：
*10×YNB（13.4%酵母氮源碱（YNB）含硫酸铵不含氨基酸）
溶解134 gYNB 于1000 ml水中，过滤除菌，加热至 YNB 完全溶解，存于 4 度。或者用34 gYNB（不含硫酸铵不含氨基酸），100 g  硫酸铵进行配制，可放 1 年。注意毕赤酵母在高浓度 YNB 下生长更好。该试剂盒中所用 YNB 的量是酿酒酵母中的两倍。
*500×生物素（0.02%）
溶解 20 mg 生物素于 100 ml 水中，过滤除菌，放于 4度，可放 1 年
*10×M（5%甲醇）
混合 5 ml 甲醇与 95 ml 水，过滤除菌存于4度，可放2个月
*10×GY（10%甘油）
混合 100 ml 甘油与 900 ml 水，过滤或高压灭菌，室温放置，可存放 1 年以上
*1 M 磷酸钾缓冲液  PH6.0
132 ml  1 M  K2HPO4，868 ml 1 M  KH2PO4，调整 PH 值为 6.0±0.1（如果需调 PH 值，用磷酸或 KOH）。过滤或高压灭菌，室温下可放 1 年以上
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Thank-you，so-blue.
7楼2011-03-03 21:02:13
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姜大磊

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiwang88 at 2011-03-03 15:22:16:
第一次摸索毕赤酵母表达。用的是丁香园 的毕赤酵母表达实验手册。做到表达那步。选用BMGY BMMY培养基表达。
关于此两种培养基的配制方法。网上查询配方：

BMGY/BMMY：2%蛋白胨，1%酵母提取物，100 mM磷酸钾缓 ...

学习中···
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Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
2楼2011-03-03 15:28:02
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xiwang88

新虫 (初入文坛)
YNB以前试过可是高压灭菌的呀，也不会有问题，为什么这次的就是配出来时浑浊的，那是不是表示培养基的ph不对？可是100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)到底要怎么配制呢？
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3楼2011-03-03 15:33:44
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
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1  各种成分分开高压
2  110°即可
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4楼2011-03-03 15:39:28
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xiwang88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2011-03-03 15:39:28:
1  各种成分分开高压
2  110°即可

那100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)  该如何配制呢？它所占的比分是多少，或者我配好了100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)该在配制BMGY  BMMY时加入多少毫升呢？
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5楼2011-03-03 19:44:23
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
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配成1M的，用的时候稀释10倍
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6楼2011-03-03 20:01:19
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ganchao1776

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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 21:58:37
121灭完菌混浊没关系的，生物素配成1000x的，接种的时候加，甲醇也在用的时候加就行了
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8楼2011-03-03 21:31:51
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-03 21:58:42
磷酸钾缓冲液配成1M的，也就是10X的，调好pH，不用灭菌，用的时候按10：1加就行了
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9楼2011-03-03 21:34:18
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xiwang88

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ganchao1776 at 2011-03-03 21:31:51:
121灭完菌混浊没关系的，生物素配成1000x的，接种的时候加，甲醇也在用的时候加就行了

是不是 灭菌后浑浊是正常？因为培养基灭完，总是像有部分没完全溶解的样子，当然也不是很多，还是看得出来的。会影响表达吗？还是我的配制是错误的？
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10楼2011-03-04 21:29:31
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