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xiwang88

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母表达用培养基BMGY BMMY的详细配制方法,请赐教。 已有9人参与

第一次摸索毕赤酵母表达。用的是丁香园 的毕赤酵母表达实验手册。做到表达那步。选用BMGY BMMY培养基表达。
关于此两种培养基的配制方法。网上查询配方:

BMGY/BMMY:2%蛋白胨,1%酵母提取物,100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0),1.34% YNB,4×10-5 生物素,1%甘油/0.5%甲醇。


这个100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)要怎样达到呢?

按网上某前辈的方法

酵母提取物   10g/L
       蛋白胨      20g/L
        K2HPO4       3g/L
        KH2PO4         11.8G/L
        超纯水      895Ml
        YNB              13.4g/L

121摄氏度灭菌后,培养基是浑浊的。无法使用啊。

所以想问问这两种培养基,各位的配制方法是怎样的呢?赐教吧。新人一个,连个培养基都不会配~~~~~帮帮我吧。
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xiwang88

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ganchao1776 at 2011-03-03 21:31:51:
121灭完菌混浊没关系的,生物素配成1000x的,接种的时候加,甲醇也在用的时候加就行了

是不是 灭菌后浑浊是正常?因为培养基灭完,总是像有部分没完全溶解的样子,当然也不是很多,还是看得出来的。会影响表达吗?还是我的配制是错误的?
10楼2011-03-04 21:29:31
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姜大磊

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiwang88 at 2011-03-03 15:22:16:
第一次摸索毕赤酵母表达。用的是丁香园 的毕赤酵母表达实验手册。做到表达那步。选用BMGY BMMY培养基表达。
关于此两种培养基的配制方法。网上查询配方:

BMGY/BMMY:2%蛋白胨,1%酵母提取物,100 mM磷酸钾缓 ...

学习中···
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
2楼2011-03-03 15:28:02
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xiwang88

新虫 (初入文坛)

YNB以前试过可是高压灭菌的呀,也不会有问题,为什么这次的就是配出来时浑浊的,那是不是表示培养基的ph不对?可是100 mM磷酸钾缓冲液(pH6.0)到底要怎么配制呢?
3楼2011-03-03 15:33:44
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1  各种成分分开高压
2  110°即可
4楼2011-03-03 15:39:28
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