应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用过葡聚糖凝胶的请进！！！
51/1返回列表
查看: 3715  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ksnight

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】用过葡聚糖凝胶的请进！！！

1.        目的：目标分子Mw=5300  杂质分子2000，及3300。分离总量约150mg 其中目标分子量约50mg。 杂质和目标分子均水溶。（上的量是否太多？）
2.        方法：采用Sephadex-G25 （普通）1000-5000。床体积4-6ml/g 折中算5，用的柱子是内径2cm，长度35cm，柱床体积110ml。计划用干凝胶约25g，（干凝胶量是否合适？装柱长度是否合适？)一般情况下，柱床体积和外水体积的比例是多少？用此种类型的凝胶，目标分子不保留，直接流出，杂质分子在里面保留一定时间，达到分离目的。

凝胶预处理和装柱子：1，用蒸馏水溶胀8h，倾倒除去一些小的漂浮的凝胶。2，再倒入沸水中约0.5h，除去气泡。冷却后填柱子（自然沉降）。（除去气泡煮沸的时间是否足够，长时间煮沸是否会破坏凝胶的结构？）（是否需要用盐水来进行自然沉降？）（需要用盐水来溶胀吗？）（有必要用指示剂来确定柱子是否可用吗？）

上样：用2-5ml盐水溶解后加入，然后用盐水洗脱剂洗脱。待到收集到外水体积Vo后，开始把收集的水溶液用二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，点板（TLC），换瓶收集，核磁分别确定是否分纯。

没有恒流泵怎么控制流速呢？

这是我的全过程，帮忙解决下以上问题，过程有什么地方有不妥的地方请指出，谢谢！！！

[ Last edited by ksnight on 2011-2-28 at 20:16 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-28 17:36:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksnight

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 19:52:57:
上样量的体积要注意，太大不行的，如果要找标准，那就找一下说明书。我记得似乎是推荐柱床体积的1%还是多少的。而且你的杂质跟目的物质分子量差别不大，感觉可能分开得不干净，试着做一下吧。

推荐的确实是1%，我的大约柱床体积为110ml，也就是加1ml左右。

有说加样大约是每ml床体积加0.2mg，这样算下来只能加20mg，汗，100mg超太多了。

还有个基本的问题没有明白，柱床体积就等于柱子的体积吧？
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-28 20:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-28 19:18:07
ksnight(金币+2): 2011-02-28 19:18:43
ksnight(金币+3): 2011-04-26 10:07:09
装好柱之后用蓝色葡聚糖来过，看柱效。上样量我感觉大了些，分子量差别不大的物质，柱效稍微差一点就肯定分不开的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-02-28 18:35:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksnight

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 18:35:37:
装好柱之后用蓝色葡聚糖来过，看柱效。上样量我感觉大了些，分子量差别不大的物质，柱效稍微差一点就肯定分不开的。

我用的是G25  1000到5000  我的目标分子是5300，
感觉可以直接出来。

量我也感觉多了点，可能上个100mg差不多。

不知道标准的是怎样
赞一下 回复此楼
3楼2011-02-28 19:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
ksnight(金币+2): 3q 2011-02-28 20:19:35
ksnight(金币+2): 2011-04-26 10:07:25
上样量的体积要注意，太大不行的，如果要找标准，那就找一下说明书。我记得似乎是推荐柱床体积的1%还是多少的。而且你的杂质跟目的物质分子量差别不大，感觉可能分开得不干净，试着做一下吧。
赞一下 回复此楼
4楼2011-02-28 19:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266求调剂 +28 阳阳哇塞 2026-04-07 28/1400 2026-04-10 10:02 by cyh—315
[考研] 调剂 化学 307 +12 73372112 2026-04-09 13/650 2026-04-10 08:41 by 探123
[考研] 一志愿厦大生物学332求调剂 +10 池池池池池池 2026-04-08 10/500 2026-04-09 17:10 by 独醉梦孤城
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-09 8/400 2026-04-09 15:17 by 探123
[考研] 26考研调剂0710 0860 +10 补补不补 2026-04-03 15/750 2026-04-09 11:13 by ditto77778
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +11 emokidd 2026-04-08 12/600 2026-04-09 09:24 by wyf236
[考研] 324求调剂 +17 想上学求调 2026-04-03 17/850 2026-04-08 20:04 by 我减肥1
[考研] 283求调剂 +19 A child 2026-04-04 19/950 2026-04-08 14:26 by xingguangj
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程，初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 0817化学工程与技术求调剂，一志愿中海洋319 +14 lv945 2026-04-04 14/700 2026-04-06 10:20 by 蓝云思雨
[考研] 化学357分，考研调剂 +11 .Starry. 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:28 by houyaoxu
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 320求调剂 +3 一样圆 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:29 by 啵啵啵0119
[考研] 085400电子信息319求调剂（接受跨专业调剂） +5 星星不眨眼喽 2026-04-03 6/300 2026-04-04 21:50 by hemengdong
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[考研] 22408，264求调剂 +3 ywh729 2026-04-03 4/200 2026-04-04 11:04 by ywh729
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭