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[交流]
【求助/交流】用过葡聚糖凝胶的请进!!!
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1. 目的:目标分子Mw=5300 杂质分子2000,及3300。分离总量约150mg 其中目标分子量约50mg。 杂质和目标分子均水溶。(上的量是否太多?) 2. 方法:采用Sephadex-G25 (普通)1000-5000。床体积4-6ml/g 折中算5,用的柱子是内径2cm,长度35cm,柱床体积110ml。计划用干凝胶约25g,(干凝胶量是否合适?装柱长度是否合适?)一般情况下,柱床体积和外水体积的比例是多少?用此种类型的凝胶,目标分子不保留,直接流出,杂质分子在里面保留一定时间,达到分离目的。 凝胶预处理和装柱子:1,用蒸馏水溶胀8h,倾倒除去一些小的漂浮的凝胶。2,再倒入沸水中约0.5h,除去气泡。冷却后填柱子(自然沉降)。(除去气泡煮沸的时间是否足够,长时间煮沸是否会破坏凝胶的结构?)(是否需要用盐水来进行自然沉降?)(需要用盐水来溶胀吗?)(有必要用指示剂来确定柱子是否可用吗?) 上样:用2-5ml盐水溶解后加入,然后用盐水洗脱剂洗脱。待到收集到外水体积Vo后,开始把收集的水溶液用二氯甲烷萃取,干燥,浓缩,点板(TLC),换瓶收集,核磁分别确定是否分纯。 没有恒流泵怎么控制流速呢? 这是我的全过程,帮忙解决下以上问题,过程有什么地方有不妥的地方请指出,谢谢!!! [ Last edited by ksnight on 2011-2-28 at 20:16 ] |
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