应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用过葡聚糖凝胶的请进！！！
51/1返回列表
查看: 3542  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ksnight

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】用过葡聚糖凝胶的请进！！！

1.        目的：目标分子Mw=5300  杂质分子2000，及3300。分离总量约150mg 其中目标分子量约50mg。 杂质和目标分子均水溶。（上的量是否太多？）
2.        方法：采用Sephadex-G25 （普通）1000-5000。床体积4-6ml/g 折中算5，用的柱子是内径2cm，长度35cm，柱床体积110ml。计划用干凝胶约25g，（干凝胶量是否合适？装柱长度是否合适？)一般情况下，柱床体积和外水体积的比例是多少？用此种类型的凝胶，目标分子不保留，直接流出，杂质分子在里面保留一定时间，达到分离目的。

凝胶预处理和装柱子：1，用蒸馏水溶胀8h，倾倒除去一些小的漂浮的凝胶。2，再倒入沸水中约0.5h，除去气泡。冷却后填柱子（自然沉降）。（除去气泡煮沸的时间是否足够，长时间煮沸是否会破坏凝胶的结构？）（是否需要用盐水来进行自然沉降？）（需要用盐水来溶胀吗？）（有必要用指示剂来确定柱子是否可用吗？）

上样：用2-5ml盐水溶解后加入，然后用盐水洗脱剂洗脱。待到收集到外水体积Vo后，开始把收集的水溶液用二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，点板（TLC），换瓶收集，核磁分别确定是否分纯。

没有恒流泵怎么控制流速呢？

这是我的全过程，帮忙解决下以上问题，过程有什么地方有不妥的地方请指出，谢谢！！！

[ Last edited by ksnight on 2011-2-28 at 20:16 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-28 17:36:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lshf0911

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我现在正在做关于葡聚糖凝胶分离纯化方面的试验，和你做的比较相似，请教个问题。你的目标分子是5300，用葡聚糖分离纯化后其余的杂质分子能够去除彻底吗？你用什么方法验证杂质去除的呢？最后得到的物质纯度高吗？
赞一下 回复此楼
13楼2016-01-28 10:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-28 19:18:07
ksnight(金币+2): 2011-02-28 19:18:43
ksnight(金币+3): 2011-04-26 10:07:09
装好柱之后用蓝色葡聚糖来过，看柱效。上样量我感觉大了些，分子量差别不大的物质，柱效稍微差一点就肯定分不开的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-02-28 18:35:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksnight

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-02-28 18:35:37:
装好柱之后用蓝色葡聚糖来过，看柱效。上样量我感觉大了些，分子量差别不大的物质，柱效稍微差一点就肯定分不开的。

我用的是G25  1000到5000  我的目标分子是5300，
感觉可以直接出来。

量我也感觉多了点，可能上个100mg差不多。

不知道标准的是怎样
赞一下 回复此楼
3楼2011-02-28 19:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
ksnight(金币+2): 3q 2011-02-28 20:19:35
ksnight(金币+2): 2011-04-26 10:07:25
上样量的体积要注意，太大不行的，如果要找标准，那就找一下说明书。我记得似乎是推荐柱床体积的1%还是多少的。而且你的杂质跟目的物质分子量差别不大，感觉可能分开得不干净，试着做一下吧。
赞一下 回复此楼
4楼2011-02-28 19:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭