24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 907  |  回复: 10

xwsooo

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】两重PCR

我用的是50微升PCR体系,一个反应体系里有两对引物(共三条引物,一条是公共引物--下游引物),两条目的产物相差18bp,用4%琼脂糖胶跑了60min,不知道为什么,有时候能分出较小的那个条带,有时候分不出来,感觉好像该条带的上游引物被另外一条上游引物竞争性抑制了?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
xwsooo(金币+1): 2011-02-28 22:18:29
为什么不尝试着分成两次PCR做呢,呵呵。你这个相当于半巢式了。
2楼2011-02-28 13:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangxue82

木虫 (著名写手)


xwsooo(金币+1): 2011-03-01 20:29:53
不懂 帮顶下
3楼2011-02-28 13:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


xwsooo(金币+1): 2011-02-28 22:19:55
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-02-28 13:33:02:
我用的是50微升PCR体系,一个反应体系里有两对引物(共三条引物,一条是公共引物--下游引物),两条目的产物相差18bp,用4%琼脂糖胶跑了60min,不知道为什么,有时候能分出较小的那个条带,有时候分不出来,感觉好 ...

那你分别单独PCR然后一起跑电泳看下,做个对比嘛
4楼2011-02-28 13:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leiyunting

木虫 (著名写手)


恩,做个对照好
5楼2011-02-28 13:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-28 13:39:50:
为什么不尝试着分成两次PCR做呢,呵呵。你这个相当于半巢式了。

分两次已经做过了,问题不大,我想一次解决最好了~~~~有没有什么好建议呢??
6楼2011-02-28 22:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-02-28 13:48:19:
那你分别单独PCR然后一起跑电泳看下,做个对比嘛

单独PCR跑过了,问题不大~~~
7楼2011-02-28 22:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
xwsooo(金币+1): 2011-03-01 20:29:31
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-02-28 22:19:34:
分两次已经做过了,问题不大,我想一次解决最好了~~~~有没有什么好建议呢??

可以尝试优化一下退火温度,呵呵
8楼2011-02-28 23:43:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-28 23:43:39:
可以尝试优化一下退火温度,呵呵

你是说两对引物在一起跑的退火温度可能和单对引物跑时不同???我现在的退火温度已经到65度了~~~
9楼2011-03-01 20:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander(金币+1): 鼓励参与交流~~~ 2011-03-01 22:41:48
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-03-01 20:27:55:
你是说两对引物在一起跑的退火温度可能和单对引物跑时不同???我现在的退火温度已经到65度了~~~

呵呵,两对引物一起的时候,理论上会由于它们的退火温度不同而有一个最佳的退火温度使得你的产物最亮。
10楼2011-03-01 20:55:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-01 20:55:02:
呵呵,两对引物一起的时候,理论上会由于它们的退火温度不同而有一个最佳的退火温度使得你的产物最亮。

哦,酱紫阿,我现在在调两条上游引物的浓度(正交设计,梯度~~),恩,那我也试一试退火温度梯度,(想想看现在的退火温度貌似比较合适条带较量的引物)
11楼2011-03-01 21:38:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xwsooo 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工求调剂! +20 RichLi_ 2026-04-06 20/1000 2026-04-07 09:20 by dick_runner
[考研] 336求调剂,一志愿中科大 +7 墨彧 yuyu 2026-04-06 7/350 2026-04-07 08:58 by Jaylen.
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +18 刺痛jk 2026-04-06 19/950 2026-04-07 00:02 by longlong0822
[考研] 工科 22408 267求推荐 +4 wanwan00 2026-04-05 5/250 2026-04-06 22:47 by chenzhimin
[考研] 材料调剂 +14 小刘同学吖吖 2026-04-06 15/750 2026-04-06 22:37 by qlm5820
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9,326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 生物学求调剂 +5 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-06 11:56 by lijunpoly
[考研] 301求调剂 +7 细胞相关蛋白 2026-04-03 7/350 2026-04-06 11:47 by lijunpoly
[考研] 考研调剂 +5 美丽的youth_ 2026-04-04 6/300 2026-04-06 06:57 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 315求调剂 +5 &123456789 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:55 by nepu_uu
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-03 4/200 2026-04-03 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿复旦材料,英一专硕,总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-01 12/600 2026-04-02 00:21 by 百秒光年
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
信息提示
请填处理意见