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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】两重PCR
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xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】两重PCR

我用的是50微升PCR体系，一个反应体系里有两对引物（共三条引物，一条是公共引物--下游引物），两条目的产物相差18bp，用4%琼脂糖胶跑了60min,不知道为什么，有时候能分出较小的那个条带，有时候分不出来，感觉好像该条带的上游引物被另外一条上游引物竞争性抑制了？
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1楼 2011-02-28 13:33:02
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xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-02-28 23:43:39:
可以尝试优化一下退火温度，呵呵

你是说两对引物在一起跑的退火温度可能和单对引物跑时不同???我现在的退火温度已经到65度了~~~
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9楼2011-03-01 20:27:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
xwsooo(金币+1): 2011-02-28 22:18:29
为什么不尝试着分成两次PCR做呢，呵呵。你这个相当于半巢式了。
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2楼2011-02-28 13:39:50
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love_st

金虫 (著名写手)
xwsooo(金币+1): 2011-02-28 22:19:55
引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2011-02-28 13:33:02:
我用的是50微升PCR体系，一个反应体系里有两对引物（共三条引物，一条是公共引物--下游引物），两条目的产物相差18bp，用4%琼脂糖胶跑了60min,不知道为什么，有时候能分出较小的那个条带，有时候分不出来，感觉好 ...

那你分别单独PCR然后一起跑电泳看下，做个对比嘛
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4楼2011-02-28 13:48:19
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leiyunting

木虫 (著名写手)
恩，做个对照好
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5楼2011-02-28 13:49:43
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