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manman424

禁虫 (初入文坛)

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cjjsdau

木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的情况跟你差不多,原来是出现条带,但是很浅,达不到回收的要求,于是我加倍了模板浓度,但结果更糟,目的条件直接见不到了,并且我是直接做的温度梯度。本来还想年前拿到条带去测序,这样是不可能了。还需要解决这个大问题
拜托,我的头像不是大苍蝇,这叫松阿扁叶峰
3楼2011-01-24 09:27:40
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
rainwander(金币+2): 很对啊,鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 22:31:12
不知道你是要扩增多大长度的基因,其实一般PCR只需要改变退火温度和延伸时间即可,退火温度有时候需要设置梯度,看看在哪一个温度下扩增出来的条带最亮,楼主的是50度,怎么感觉有点低呢?下来就是延伸时间了,楼主的是1min,貌似基因很小呢?其实基因一般小于1Kb的话,1Min足以,1-2Kb的话,2min,2Kb以上就2-3min了~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-01-23 20:54:46
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可不可以以得到的PCR为模板做一次PCR
不过如果你的片段很长 可能有较高的突变率
ANNA&KEVIN
4楼2011-01-24 13:25:53
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manman424

禁虫 (初入文坛)

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5楼2011-01-25 10:16:57
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