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由田120516

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】基因敲除试验

我最近在做基因敲除试验，看了很多的文献，有一个问题一直让我很困惑，希望大家帮我解惑，谢谢！
我的方法是首先扩增要敲除的基因的全序列，并将其连接在骨架质粒pUC18的多克隆位点中，然后要将抗生素抗性基因插入到该基因中间，使其失活，从而构建用于基因敲除的自杀质粒。我不明白的是该抗生素抗性基因需要自己的启动子吗，还是它可以利用质粒本身的启动子进行转录翻译？
我看过很多文献，在这一点上都未做详细说明。但经过分析（查看抗生素抗性基因的长度），好像不需要自己的启动子。

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1楼 2011-01-23 09:12:31

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由田120516

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引用回帖:

Originally posted by 天使托 at 2011-01-23 10:32:30:
你的方法就是插入突变了，给基因中间插入的是什么抗性的片段，只要质粒复制的话，这个抗性基因就可以进行表达，从而达到筛选的目的。楼主做的跟我们实验室做的差不多啊！

[ Last edited by 天使托 on 2011-1- ...

你的意思就是抗生素抗性基因还是要有自己的启动子，是吧？
我还有个问题，质粒上带的抗生素抗性基因的启动子一定紧靠它的前面吗？有的质粒带有双抗，那它的启动子是一个还是两个？谢谢！