24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

由田120516

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 27
帖子: 24
在线: 3.9小时
虫号: 1118994

[交流] 【求助/交流】基因敲除试验

我最近在做基因敲除试验，看了很多的文献，有一个问题一直让我很困惑，希望大家帮我解惑，谢谢！
我的方法是首先扩增要敲除的基因的全序列，并将其连接在骨架质粒pUC18的多克隆位点中，然后要将抗生素抗性基因插入到该基因中间，使其失活，从而构建用于基因敲除的自杀质粒。我不明白的是该抗生素抗性基因需要自己的启动子吗，还是它可以利用质粒本身的启动子进行转录翻译？
我看过很多文献，在这一点上都未做详细说明。但经过分析（查看抗生素抗性基因的长度），好像不需要自己的启动子。

回复此楼

» 猜你喜欢

自荐读博已经有3人回复
求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？已经有5人回复
论文终于录用啦！满足毕业条件了已经有22人回复
不自信的我已经有5人回复
磺酰氟产物，毕不了业了！已经有4人回复
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球已经有8人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求教基因defeciency是什么意思已经有4人回复
如何做同源重组已经有6人回复
【求助/交流】酿酒酵母URA3基因敲除的问题已经有30人回复
【交流】想问问大家那种实验用黑色小鼠叫什么小鼠啊？已经有14人回复
【求助/交流】基因敲除后的回补实验，如何确定基因的上游和下游的调节区？已经有4人回复
【原创】植物授精信号被发现（文章背后的故事）已经有7人回复
【求助/交流】实验动物疾病模型已经有16人回复
SCI论文从入门到精通（第一版）已经有93人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-01-23 09:12:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 13:35:07
由田120516(金币+1): 2011-01-23 19:37:52

确切的说，需要

一般都是在抗性基因的atg前面多留100多个碱基~

加抗性基因是后一步了，所以试试看，不行再留长一点。有抗生素筛选，表达了就行

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2011-01-23 09:52:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

引用回帖:

Originally posted by 由田120516 at 2011-01-24 17:55:05:

不好意思，我可能没说明白。。。我的意思是我要将一个抗生素抗性基因插入到要被敲出的基因的中间，使该基因失活，不能表达蛋白。从而成功构建用于基因敲除的自杀质粒。我想问的是我要插入的这个抗生素抗性基因是 ...