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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】求助 小分子量蛋白多肽纯化
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crystal8595

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助 小分子量蛋白多肽纯化

重组酵母菌发酵液过了一次离子柱，目标蛋白在7000kDa左右（红圈标出），但在20kDa以上有一些杂蛋白，我想把这些杂蛋白与我的目标蛋白分离，想先用50kDa的超滤去除大分子量的蛋白，然后用Sephadex G50分，不知道合适不合适啊，Bio-gel p10呢~
请各位帮帮忙，谢谢~



[ Last edited by crystal8595 on 2011-1-9 at 20:33 ]
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1楼 2011-01-09 20:31:37
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by crystal8595 at 2011-01-10 10:57:49:
哦~这个超滤管上样应该挺小的吧，我是做重组蛋白分离的，不做晶体~我想用10kDa的超滤膜也可以的吧


呵呵，超滤管有小有大（小的可以用来纯化微量的DNA，大的可以处理发酵液上清），主要得看你的离心机大小了。超滤膜没用过，不过原理都是截留，应该没什么问题。
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7楼2011-01-10 11:05:37
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-09 21:43:27
MM你先搞清楚，你的目的蛋白是7kDa，不是7000kDa。所以你可以用10kDa的超滤管超滤，滤出液中是你的蛋白。
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2楼2011-01-09 20:48:48
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
crystal8595(金币+1): 2011-01-10 08:55:03
G50的分离范围是1500-30000，理论上是可行的，试一把吧。
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3楼2011-01-09 20:52:21
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crystal8595

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-09 20:48:48:
MM你先搞清楚，你的目的蛋白是7kDa，不是7000kDa。所以你可以用10kDa的超滤管超滤，滤出液中是你的蛋白。

额...没注意，打错咧，嘿 超滤管很贵吧
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4楼2011-01-09 21:58:44
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
dhd997(金币+2):热心 2011-01-10 09:09:45
引用回帖:
Originally posted by crystal8595 at 2011-01-09 21:58:44:

额...没注意，打错咧，嘿 超滤管很贵吧

几十块钱一个，呵呵，不算贵。如果总是用它来纯化同一个蛋白的话，可以用很久的，实验室的一个博士说他的一批超滤管用了快两年了。

你也是做蛋白晶体的？？？
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5楼2011-01-09 22:05:07
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crystal8595

银虫 (初入文坛)
哦~这个超滤管上样应该挺小的吧，我是做重组蛋白分离的，不做晶体~我想用10kDa的超滤膜也可以的吧
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-09 22:05:07:


几十块钱一个，呵呵，不算贵。如果总是用它来纯化同一个蛋白的话，可以用很久的，实验室的一个博士说他的一批超滤管用了快两年了。

你也是做蛋白晶体的？？？

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6楼2011-01-10 10:57:49
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crystal8595

银虫 (初入文坛)
谢谢咯，请问您用的那种大的超滤管是什么公司的呢？我查了查好像都是进口的，还挺贵呢~
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-10 11:05:37:
呵呵，超滤管有小有大（小的可以用来纯化微量的DNA，大的可以处理发酵液上清），主要得看你的离心机大小了。超滤膜没用过，不过原理都是截留，应该没什么问题。

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8楼2011-01-10 11:18:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by crystal8595 at 2011-01-10 11:18:20:
谢谢咯，请问您用的那种大的超滤管是什么公司的呢？我查了查好像都是进口的，还挺贵呢~

进口的，呵呵。amicon 的超滤管，大的是比较贵。中等大小的和小的就比较便宜。因为我们都是破壁后作的，所以用不上那么大的。
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9楼2011-01-10 11:20:45
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有AKTA的话也就用不到大的超滤管了，直接用离子交换柱纯化，浓缩。然后想过分子筛的话再用超滤管进行浓缩就OK了，体积也用不了那么大。
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10楼2011-01-10 11:23:59
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crystal8595

银虫 (初入文坛)
恩，我先用凝胶一下试试吧，再次感 谢啦~~~~~
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-10 11:23:59:
有AKTA的话也就用不到大的超滤管了，直接用离子交换柱纯化，浓缩。然后想过分子筛的话再用超滤管进行浓缩就OK了，体积也用不了那么大。

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11楼2011-01-10 11:26:02
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小分子可以参考透析袋，更便宜
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12楼2011-01-10 11:40:14
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leibo15

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
13楼2011-01-10 14:18:10
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