24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wmqouc

金虫 (著名写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 4977.3
帖子: 1031
在线: 192.4小时
虫号: 752435

[交流] 【求助/交流】求助制备有活性烟草蚀斑病毒(TEV)酶的方法

各位大侠：
本人最近用大肠杆菌表达烟草蚀斑病毒(TEV)酶，蛋白表达出来了，纯度浓度都很高，
但是TEV酶切效率很低。
我的制备过程如下：大肠杆菌培养基是TB 培养基，37摄氏度培养至对数期后降温至18度，加入终浓度0.5mM的IPTG，继续培养20小时后收菌。超声破碎后纯化过程在冰水混合物中进行。
请问各位大侠用的什么培养基？以及用什么培养纯化条件。

回复此楼

» 猜你喜欢

寻求一种能扛住强氧化性腐蚀性的容器密封件已经有7人回复
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有8人回复
申请2026年博士已经有6人回复
请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。已经有5人回复
天津工业大学郑柳春团队欢迎化学化工、高分子化学或有机合成方向的博士生和硕士生加入已经有5人回复
2025冷门绝学什么时候出结果已经有7人回复
请问有评职称，把科研教学业绩算分排序的高校吗已经有6人回复
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了已经有7人回复
请问下大家为什么这个铃木偶联几乎不反应呢已经有5人回复
康复大学泰山学者周祺惠团队招收博士研究生已经有6人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

镍柱重复使用，效率不高已经有3人回复
【分享】你还在用PMSF吗已经有20人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2011-01-06 18:47:21

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

一碗水端平

木虫 (职业作家)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 5082.2
帖子: 4344
在线: 169.9小时
虫号: 577493

wmqouc(金币+1): 2011-01-14 20:03:25

引用回帖:

Originally posted by wmqouc at 2011-01-13 15:09:03:

谢谢回复！
我一般是将菌液收后先在液氮冻住，然后冻于-80度冰箱，第二天或过几天再纯化蛋白。
看来今后我应该收菌后接着做。
还有我上次纯化TEV时，在超声破碎时加入了PMSF，下次做就不加PMSF了，怕抑制蛋白 ...

PMSF不会抑制活性的，我在纯化时也加入PMSF的。你的蛋白可能是挺难切的，连买的都要3:1。我们实验室的蛋白有的是50-100:1；有的是10-20:1。
我第一次纯化时就把菌在-80度冰箱冻了2天，结果纯化出来就没什么活性。后来就收菌后直接纯化，活性就还可以。

[ Last edited by 一碗水端平 on 2011-1-14 at 13:14 ]