Originally posted by laoshu16 at 2011-01-10 12:27:31:

1mM IPTG 30°C 诱导3-4h 收获 超声的时候最好不要发热和打出气泡 时间短一点 我现在还在摸纯化的条件 最后要么不够纯 要么浓度不高

Originally posted by laoshu16 at 2011-01-07 10:32:46:
我也在做TEV 我用的是LB培养基 活性不好是不是破碎细胞时间过长或者打出气泡了 或者你的酶切条件不是它的最佳条件

Originally posted by laoshu16 at 2011-01-07 10:32:46:
我也在做TEV 我用的是LB培养基 活性不好是不是破碎细胞时间过长或者打出气泡了 或者你的酶切条件不是它的最佳条件

Originally posted by laoshu16 at 2011-01-10 12:27:31:

1mM IPTG 30°C 诱导3-4h 收获 超声的时候最好不要发热和打出气泡 时间短一点 我现在还在摸纯化的条件 最后要么不够纯 要么浓度不高

Originally posted by 一碗水端平 at 2011-01-09 11:46:44:
SB培养基。0.1mM IPTG，20度20小时。

[ Last edited by 一碗水端平 on 2011-1-11 at 10:06 ]

Originally posted by wmqouc at 2011-01-12 10:37:42:

多谢回复
请问在镍柱纯化后的TEV应该用脱盐柱脱去咪唑吧？

Originally posted by wmqouc at 2011-01-10 15:45:57:

你的酶切效率怎样啊？

Originally posted by 一碗水端平 at 2011-01-13 10:40:57:

看切什么蛋白。一般是1:50 酶切1个小时。

纯化是最好不要将菌放到冰箱里冻，而是收了菌后直接纯化，这样活性会好一些。

Originally posted by wmqouc at 2011-01-13 15:09:03:

谢谢回复！
我一般是将菌液收后先在液氮冻住，然后冻于-80度冰箱，第二天或过几天再纯化蛋白。
看来今后我应该收菌后接着做。
还有我上次纯化TEV时，在超声破碎时加入了PMSF，下次做就不加PMSF了，怕抑制蛋白 ...

Originally posted by wmqouc at 2011-01-13 15:09:03:

谢谢回复！
我一般是将菌液收后先在液氮冻住，然后冻于-80度冰箱，第二天或过几天再纯化蛋白。
看来今后我应该收菌后接着做。
还有我上次纯化TEV时，在超声破碎时加入了PMSF，下次做就不加PMSF了，怕抑制蛋白 ...

Originally posted by laoshu16 at 2011-01-17 07:51:10:
还不错 最近做了一次 在四度切完全了

Originally posted by laoshu16 at 2011-01-17 15:55:14:
你说的是摩尔比吗 酶活这么高

Originally posted by laoshu16 at 2011-02-24 09:15:08:
这是我参考的protocal 除了PEI沉淀没有做 其它都是按照它做的