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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 【求助】高效液相新柱子用流动相后柱压升高，已经第二根新柱子了
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7clover

金虫 (著名写手)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
warlen(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 11:48:24
流动相之前用5%甲醇冲，3-5倍体积置换原来的甲醇，流动相走完后要先用5%甲醇水冲洗1个小时才能走梯度冲。
另外如果样品脏，考虑用保护柱。冲保护柱时倒着冲，也就是接到柱子后边。
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一片叶子代表祈求一片叶子代表希望一片叶子代表爱情四片叶子=四种幸福
31楼2011-01-10 11:46:10
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luxin6222

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1.什么柱子？这个很重要！
2.样品溶剂与流动相是否互溶？
你用的盐浓度肯定不至于伤害柱子，一般盐浓度上限是100mmol。与有机相替换时用含10%有机相过渡一下就没问题了。
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32楼2011-01-10 21:06:39
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永恒国度

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看了前面的讨论，这点盐浓度肯定没问题的，醋酸盐也不算强，我们实验室经常干到100mM都没问题，楼主的柱子清洗也没有问题，不过你有没有注意过你的盐的质量？特别是国产盐的话，有时杂质还挺多的 使用之前缓冲盐都要过下0.22um的滤膜
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33楼2012-03-06 23:45:17
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liu2011

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1957081楼: Originally posted by 永恒国度 at 2012-03-06 23:45:17
看了前面的讨论，这点盐浓度肯定没问题的，醋酸盐也不算强，我们实验室经常干到100mM都没问题，楼主的柱子清洗也没有问题，不过你有没有注意过你的盐的质量？特别是国产盐的话，有时杂质还挺多的 使用之前缓冲盐都要 ...

会不会是管路堵了，我以前遇到过
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34楼2012-06-19 15:41:17
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yp3181321

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问题解决了吗？没解决的话，我想我有个办法，你可以试试看。
你说确定是柱子的压力高，我分析是你的盐在柱子里面析出了，你用5%的甲醇水没有冲出来的原因。
直接把你抽滤后的水加热，加热到大概50摄氏度左右去冲柱子，流速控制在0.3-0.5吧，冲半个小时，记住，水的温度一直保持在50度，不断地加热水进去就好了，还有柱温箱也设为50度，应该就冲下来了，冲下来之后你立刻用甲醇替换出来里面的水，希望对你有帮助吧
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35楼2012-06-19 22:32:45
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hongrixiake

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主 原因找到了的话   记得发上来分享下哈
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36楼2012-06-26 15:49:34
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tigeropen

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉是流动相的问题，请一定保证流动相干净
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37楼2012-06-26 16:22:18
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fannis

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
27楼: Originally posted by jiachenzhong at 2011-01-09 09:01:03
肯定是盐浓度高引起的，我也碰到过这种情况，要用水大量清洗，洗上一星期以上

确定？我洗了几天感觉都没有什么用，压力还是很高
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爱生活爱媳妇儿~
38楼2013-04-13 15:12:35
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fannis

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
32楼: Originally posted by luxin6222 at 2011-01-10 21:06:39
1.什么柱子？这个很重要！
2.样品溶剂与流动相是否互溶？
你用的盐浓度肯定不至于伤害柱子，一般盐浓度上限是100mmol。与有机相替换时用含10%有机相过渡一下就没问题了。

我平时跑液相的时候，用乙腈过度到水，然后过度到乙酸铵，我记得乙酸铵的盐浓度用的是0.1M的，这个是不是对柱子影响很大，柱子是C18亲水柱，一般实验室一年要换好几根柱子的。。。我因为刚来实验室还没有一年，到底是这个样品就是很费柱子还是我们操作不当呢
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爱生活爱媳妇儿~
39楼2013-04-13 15:18:33
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耳朵

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有看一下柱子使用有没有需要特别注意的？
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40楼2013-04-13 22:08:29
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