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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR反应体系的配制
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hclcarl

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR反应体系的配制 已有6人参与

宋体
小弟现在通过兼并引物扩增片段 可是设计了10引物连一条杂带也没有出 不知道是不是反应体系的事 在这里想请各位大侠帮我看一下我的反应体系有没有问题。
我的反应体系是：10*buffer  2.5ul
                                  MgCl2  1.5ul
                                   dNTP  2ul
                                     Taq  0.125ul
                                        水 15.875ul
                                     合计 22ul
加上引物和cDNA一共是25ul
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1楼 2010-12-17 09:57:52
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mxianl

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议你写上PCR体系中各种成分的浓度,只有体积是没法知道终浓度.
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观海听风
2楼2010-12-17 14:17:18
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LZ如果对反应体系没把握就用预混的酶吧。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
3楼2010-12-17 14:48:21
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hclcarl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-12-17 14:48:21:
LZ如果对反应体系没把握就用预混的酶吧。

什么是 预混的酶？不明白
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4楼2010-12-17 15:15:08
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hclcarl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by mxianl at 2010-12-17 14:17:18:
建议你写上PCR体系中各种成分的浓度,只有体积是没法知道终浓度.

谢谢 我用的是宝生物卖的Taq酶 买回来的时候各种试剂都是分装好的 自己根据体系用量自己加就行了 Taq是5U\ul  MgCl2 是25mM Buffer 和都没有标 不知道合适的浓度是多少
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5楼2010-12-17 15:36:04
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hclcarl at 2010-12-17 15:15:08:

什么是 预混的酶？不明白

应该是说的mix吧
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
6楼2010-12-17 15:36:28
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR的所有试剂除引物、模板外的所有组分都已经预混在一起的。不用自己配。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
7楼2010-12-17 15:43:09
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-12-17 15:36:28:

应该是说的mix吧

对的。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
8楼2010-12-17 15:43:35
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love_st

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我估计你的dNTPs是10mM的，那你加2ul终浓度就是0.8mM了感觉上有点高了
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9楼2010-12-17 15:49:39
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wangds

金虫 (正式写手)
降低Tm值扩增试试
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10楼2010-12-17 15:50:43
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