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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用硫酸铵盐析到饱和度90%了，酶活还是在上清液里，求助各位虫友！
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leewolf

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】用硫酸铵盐析到饱和度90%了，酶活还是在上清液里，求助各位虫友！ 已有12人参与

我从发酵液里提取酶，看了很多文献说用硫酸铵盐析到饱和度65%时，酶活基本上都是在沉淀里，但是我盐析到90%了，上清液中的酶活还是有的且比沉淀中强？希望各位指导，谢谢！
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1楼 2010-12-04 13:42:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

leewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by muchongchong838 at 2010-12-11 13:01:00:
好事啊。那么说明大部分杂蛋白都被沉淀了，你吧上清离心出来，超滤浓缩一下，电泳看看纯不纯？

这个意见我觉得给力，谢谢你，回头我试试
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23楼2010-12-11 22:08:03
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twisty

木虫 (正式写手)

newer
★
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说明你的酶在你的溶液pH条件下是高度可溶的，可调节溶液的ph值来实现。
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兼并碱基M=A/CR=A/GW=A/TS=G/CY=C/TK=G/TV=A/G/C&n...
24楼2011-09-28 08:02:08
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
别人的东西跟你的不一样，正常
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-12-04 13:47:53
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leewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-12-04 13:47:53:
别人的东西跟你的不一样，正常

同样的东西
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3楼2010-12-04 18:57:16
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
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看天(金币+1):鼓励 2010-12-04 22:39:44
你怎么配饱和硫酸铵的？用多少离心分离上清和沉淀的，用什么方法检测的？
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52187644
4楼2010-12-04 19:17:44
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leewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-12-04 19:17:44:
你怎么配饱和硫酸铵的？用多少离心分离上清和沉淀的，用什么方法检测的？

先谢谢你，我是用固体的硫酸铵粉末，1200rpm，10min离心的，我的是一种溶纤酶，所以是用纤溶平板检测的（看透明圈大小）
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5楼2010-12-04 20:36:20
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):不一样才好 2010-12-04 22:11:22
你都说了是文献上的结果了，怎么和你的是一样的？即使是同一种酶，蛋白质也可能不同，我深有体会，都是EC3.2.1.3，别人的很好沉淀，我的就很难，要加到100%饱和度才能完全沉淀。所以你别纠结了，接受现实，再设计程序中因此而需要改变的步骤。
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6楼2010-12-04 21:37:15
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leewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-12-04 21:37:15:
你都说了是文献上的结果了，怎么和你的是一样的？即使是同一种酶，蛋白质也可能不同，我深有体会，都是EC3.2.1.3，别人的很好沉淀，我的就很难，要加到100%饱和度才能完全沉淀。所以你别纠结了，接受现实，再设计 ...

十分感谢
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7楼2010-12-04 22:26:35
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
文献中的数据只能作为参考，提供一个思路，很多实验重复性都是比较差的，但是你这个我建议再做一次，用饱和的硫酸铵溶液比较下，然后离心的时候是不是将时间延长点呢，确定都离心下来了么，如果离心不完全，上清中肯定还是会有酶的对吧。
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52187644
8楼2010-12-05 10:21:56
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leewolf

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-12-05 10:21:56:
文献中的数据只能作为参考，提供一个思路，很多实验重复性都是比较差的，但是你这个我建议再做一次，用饱和的硫酸铵溶液比较下，然后离心的时候是不是将时间延长点呢，确定都离心下来了么，如果离心不完全，上清中 ...

谢谢你，这一批发酵好了我再试试，十分感谢！
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9楼2010-12-05 14:21:57
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liyang003

金虫 (小有名气)
★
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先要调pH吧，调到等电点附近，比较好沉淀，这一点文献上基本上不讲的。
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10楼2010-12-08 10:23:54
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