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【求助/交流】使用TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit试剂盒克隆启动子的问题
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【求助/交流】使用TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit试剂盒克隆启动子的问题
已有1人参与
使用TaKaRa LA PCR in vitro Cloning Kit试剂盒克隆启动子时,遇到了很严重的自扩现象,一轮弥散,二轮出现的条带全部为C2或S2单引物对照自扩条带,这是什么原因造成的呢?如何解决该问题?谢谢! (问题转自百度知道)
我自己也用这个试剂盒做了很久,遇到同样问题,PCR条件摸索了很多遍。最后没辙,直接拿弥散带连接,转化,测序。发现克隆到的序列2边引物都是C2(C2是对应的接头序列而设计的引物,Kit自带)。也就是说,PCR的条带是单引物P出来的。
打算试试巢扩。可还是很不确定。
如果有用过这个试剂盒的最好啦。因为按照试剂盒里的说明,理论上很难出现自扩现象的。
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