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卡卡其天空

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】亚细胞定位 无结果 求教 求指导啊

我的外源基因导入到带有GFP的163载体后，洋葱表皮细胞 打基因枪 在激光共聚聚显微镜观察，只有空载体很亮，导入的都不亮。
大家帮我分析一下原因。有成功经验的分享一下。多谢。
最后把成功的实验步骤也发给我，十分感谢啊。
PS：我是和师兄一起做的， 他的七个基因 全不亮，我的一个也不亮，他打了两次枪 都不亮。可空载体是亮的。大牛指导下。我是实验新手，刚开始就遇挫。伤心啊。呵呵
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1楼2010-11-15 10:56:17
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流，欢迎常来 2010-11-15 12:52:13
卡卡其天空(金币+2):今天早上查文献 ，才发现 太急于做了，忘了去终止子。失败啊 失败。很好的教训，十分感谢啊。 2010-11-15 14:53:36
首先测序保证你的基因没有错配、移码或者未删掉终止子这样的问题。
然后可以考虑的方法：
1、延长培养时间，融合蛋白越大出荧光时间越靠后，表达量也越低。
2、双35S启动子
3、GFP放到目标蛋白的N端
4、原生质体瞬时表达
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2楼2010-11-15 11:38:15
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