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卡卡其天空

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 19.2
帖子: 13
在线: 8.2小时
虫号: 836018

[交流] 【求助/交流】亚细胞定位无结果求教求指导啊

我的外源基因导入到带有GFP的163载体后，洋葱表皮细胞打基因枪在激光共聚聚显微镜观察，只有空载体很亮，导入的都不亮。
大家帮我分析一下原因。有成功经验的分享一下。多谢。
最后把成功的实验步骤也发给我，十分感谢啊。
PS：我是和师兄一起做的，他的七个基因全不亮，我的一个也不亮，他打了两次枪都不亮。可空载体是亮的。大牛指导下。我是实验新手，刚开始就遇挫。伤心啊。呵呵

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1楼 2010-11-15 10:56:17

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lzhwin

木虫 (正式写手)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 1977.1
帖子: 489
在线: 58.1小时
虫号: 481076

★ ★
lstt09nk(金币+2):鼓励交流，欢迎常来 2010-11-15 12:52:13
卡卡其天空(金币+2):今天早上查文献，才发现太急于做了，忘了去终止子。失败啊失败。很好的教训，十分感谢啊。 2010-11-15 14:53:36

首先测序保证你的基因没有错配、移码或者未删掉终止子这样的问题。
然后可以考虑的方法：
1、延长培养时间，融合蛋白越大出荧光时间越靠后，表达量也越低。
2、双35S启动子
3、GFP放到目标蛋白的N端
4、原生质体瞬时表达

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2楼2010-11-15 11:38:15