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[交流]
【求助/交流】大肠表达遇到的让人纠结的蛋白，求解
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本人最近在做一个植物蛋白100kd，两对二硫 键。大肠表达，pet32a。初期很轻松的就在胞内得到可溶表达，但是无论如何优化温度和IPTG浓度，都无法得到活性的蛋白，测不到酶活。此后，在破壁上清液中添加了0.4M L-Arg,20摄氏度10h后，能够检测到酶活。但是在发酵过程中直接添加0.1-0.4M 精氨酸没有效果不知有没有虫友遇到过相似的问题，帮忙解决一下： 1.在精氨酸添加前后，蛋白可能发生了那些变化，这些变化如何通过实验验证？ 2.如何在发酵过程中直接得到活性的蛋白？ 3.哪位虫友有相关的文章可能会对这个实验有所帮助，请在回帖中给个题目 非常感谢 |
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