24小时热门版块排行榜    

查看: 384  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xinyaolu

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】大肠表达遇到的让人纠结的蛋白,求解

本人最近在做一个植物蛋白100kd,两对二硫键。大肠表达,pet32a。初期很轻松的就在胞内得到可溶表达,但是无论如何优化温度和IPTG浓度,都无法得到活性的蛋白,测不到酶活。此后,在破壁上清液中添加了0.4M L-Arg,20摄氏度10h后,能够检测到酶活。但是在发酵过程中直接添加0.1-0.4M 精氨酸没有效果

不知有没有虫友遇到过相似的问题,帮忙解决一下:

1.在精氨酸添加前后,蛋白可能发生了那些变化,这些变化如何通过实验验证?

2.如何在发酵过程中直接得到活性的蛋白?

3.哪位虫友有相关的文章可能会对这个实验有所帮助,请在回帖中给个题目

  非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先,植物基因建议在酵母表达。
体外反应中精氨酸的作用可能是帮助蛋白refold,你直接表达的蛋白虽然可能,但是折叠可能仍有问题。 你在发酵时直接加入精氨酸的话,精氨酸会被代谢掉,没有对应的效果。
如果坚持在大肠表达的话,可以考虑目标基因和分子伴侣共表达,可以考虑takara的chaperone质粒。
3楼2016-05-06 09:19:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

高亚楠六

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
您好,请问这个问题怎么解决的,为什么要加精氨酸
2楼2016-05-05 15:38:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 351求调剂 +3 麦克阿磊 2026-03-24 3/150 2026-03-26 23:13 by 不吃魚的貓
[考研] 316求调剂 +3 江辞666 2026-03-26 3/150 2026-03-26 23:11 by Dyhoer
[考研] 一志愿武汉理工,总分321,英一数二,求老师收留。 +3 nnnnnnn5 2026-03-25 3/150 2026-03-26 22:38 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 考研调剂 +8 小蜡新笔 2026-03-26 8/400 2026-03-26 16:18 by dick_runner
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 332求调剂 +6 032500 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:45 by 418490947
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见