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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酵母菌摇床培养被细菌污染的问题？
汕头大学海洋科学接受调剂
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lvdunhui55

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酵母菌摇床培养被细菌污染的问题？

我们生产酵母菌，原来用四层绒布封口1000ml的三角瓶（里面装250ml豆芽汁培养基），摇床培养3天，做了一个ck，不加任何菌。3天过后涂平板ck里面细菌在千万级左右，酵母菌中也有细菌。后来在培养基里面加氯霉素，细菌与酵母菌的比值在1：1000左右或以下，但酵母菌大量减少从5-10亿/ml到1-2亿/ml。最后老板买来了硅胶塞，我在实验室下做了2次实验，空白对照有：不加任何菌的带硅胶塞的三角瓶（ck0），加酵母带绒布的三角瓶（ck1，ck2，ck3）；实验组：加酵母带硅胶塞的三角瓶（1，2，3）（酵母菌有3种，每个接一个三角瓶）。同等条件下培养3天，后涂平板用不加氯霉素的PDA培养基检测。检测结果：ck0（稀释一个次方）：无任何菌生长；ck1，ck2，ck3：酵母菌在5亿/ml以上，细菌在500万左右；实验组1，2，3：只有酵母菌，酵母菌数2亿/ml左右。后来我们在摇床上培养酵母，接了20个三角瓶用硅胶塞。3天过后，将20个三角瓶的酵母菌液混在一起，用牛肉膏蛋白胨涂平板检测细菌在1000万以上。现在就是不知道这是怎么回事?硅胶塞应该可以阻止细菌进入三角瓶。但是那些细菌从哪儿来的呢？我前期做的2次实验用硅胶塞的都没有细菌（每次只接了3瓶)，为什么接20瓶后就有了细菌呢？是操作上的问题吗？
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1楼 2010-11-14 18:49:35
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rural2084

木虫 (正式写手)
lvdunhui55(金币+1):我觉得菌种的问题在本次实验中可能最小，其实酵母菌种我涂平板3次，划线4次，在用不加氯霉素的PDA检测无细菌，本次实验中的那个酵母前2次都没有检测出细菌，最后一次检测出来了。但也不排除是菌种的问题。 2010-11-15 10:41:25
lvdunhui55(金币+2): 2010-11-17 20:04:31
还有就是菌种本身有没有污染细菌，建议连续划菌落两到三次，再接种试试
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5楼2010-11-15 09:25:48
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-14 19:23:23
lvdunhui55(金币+2):有可能，前2次是我一人操作，最后一次是2人操作。 2010-11-14 19:28:28
lvdunhui55(金币+2): 2010-11-17 20:03:33
会不会是灭菌锅的问题，灭菌不彻底，或者是无菌操作台，你做的量大的话，操作台中摆放物品太多，也容易染菌。
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2楼2010-11-14 19:08:28
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zhijun01

木虫 (正式写手)
lvdunhui55(金币+1):2人操作的话确实有可能，目前不知道如果真的是人为污染到底操作中可以污染到什么程度。毕竟我们接的酵母数量远远大于污染的细菌数。 2010-11-14 19:38:18
lvdunhui55(金币+1): 2010-11-17 20:03:44
是不是无菌操作不够好，尽量注意下细节吧，污染无处不在
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3楼2010-11-14 19:34:11
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sunny-207

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rural2084 at 2010-11-15 09:25:48
还有就是菌种本身有没有污染细菌，建议连续划菌落两到三次，再接种试试

谢谢
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6楼2016-12-22 16:27:03
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