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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞培养污染问题
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花雨林

木虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】细胞培养污染问题

求助细胞污染解决方法:
污染表现是很碎小的黑色聚堆的东西（能想象一堆碎松针堆个圆吗），高倍镜下似乎能动（或者只是物理运动），动作幅度不大，发展较慢，出现后对细胞生长和状态看不出影响，但一旦吹散则发展迅速，污染明显，细胞死亡，培养基发黄.应该不是细菌污染。
  请问这是什么污染，可能来源哪里，怎么避免？
100金币悬赏，若有帮助再追加悬赏100！



[ Last edited by silicare on 2010-12-30 at 08:48 ]
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1楼 2010-11-10 17:01:48
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wufengjian

木虫 (正式写手)
花雨林(金币+5):谢谢！因为同瓶培养基培养的其他细胞是好的，所以没怀疑是培养基的问题，不过也在做检菌了。另外问一句，以前见过的细菌污染发展都很快，不出两天细胞肯定死了，这次细胞长的很好，只是后期污染多了才死的，会是细菌吗？ 2010-11-11 08:57:23
感觉是细菌污染，培养一下培养基看看吧，只能是操作小心，加些抗生素了。
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2楼2010-11-10 21:41:30
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yuanzhiqin.119

至尊木虫 (著名写手)
花雨林(金币+5):谢谢！更换培养基之后污染就没了吗，我们这个很顽固啊 2010-11-11 09:01:00
之前我们这边也出现过类似的情况，培养基之类的东西，用微孔滤膜过滤下再使用，另外，还有可能是酒精灯芯的灰烬。
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3楼2010-11-10 22:10:55
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蓝天白云haha

银虫 (正式写手)
花雨林(金币+5):谢谢！单独培养细菌倒没想过，试试。 2010-11-11 20:35:04
将培养基进行空白培养看看培养基是否污染，取污点上的细菌培养确定是什么菌，或者进行染色看是否为真菌污染
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4楼2010-11-11 16:42:08
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zhrei98

禁虫 (初入文坛)
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-11-11 20:35:26
本帖内容被屏蔽
5楼2010-11-11 17:05:41
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
花雨林(金币+5):谢谢！图确实不清楚，没能拍到清晰的 2010-11-11 20:38:31
图不是很清楚，不过以前遇到过一种情况你可以参考，那就是细胞太密集了，局部推的特别高，会突然窜出好几个成堆的凸起，而且都是死细胞，比较像做原代细胞往外爬时的情景

不放心的话做一个革兰氏染色
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6楼2010-11-11 17:07:28
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rainbows1

禁虫 (著名写手)
花雨林(金币+10):谢谢！情况和你说的很相似，我是做单抗的，有的细胞没了项目就得从头来，哭啊 2010-11-11 20:45:43
本帖内容被屏蔽
7楼2010-11-11 17:23:23
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):辛苦 2010-11-12 09:44:05
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-11-12 19:41:09
污染是细胞培养中比较头疼的问题。一旦发现污染，最有效的方法是把细胞、培养基、胰酶等细胞培养用品丢掉，彻底打扫一下卫生。用新培养基复苏一只新的细胞，以后操作注意，这样是最省时省力的。费劲脑筋去除污染有时可能收不到好的效果。
看你的描述，培养基发黄，肯定是污染了，可能是细菌或霉菌。要是霉菌，培养基应该是清澈的，要是细菌培养基变浑浊。要进一步鉴定，可以用普通光学显微镜（非细胞培养的倒置显微镜）做个涂片观察一下。
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8楼2010-11-11 21:41:31
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wufengjian

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rainbows1 at 2010-11-11 17:23:23:
以前我师弟也遇到过，基本上我们判断是易结团的细菌。开始长得很慢，一旦扩散就很快使培养基变浑浊。

出现染菌只能丢掉，重新开始培养。个人觉得不必试图把菌杀死保留细胞，因为这一般无法办到。

控制的办法 ...

感觉是正解。高倍镜下看“团”的周围，其实可以看打到很多细菌在不停地“打弯”运动。如果发现得早，其实可以尽可能地将其稀释除掉。但是目前这个地步了，哎……
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9楼2010-11-12 00:08:20
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mafang68

金虫 (著名写手)
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-11-12 19:41:42
以前遇到过这种问题，原因在于买的血清。你可以换个血清试试
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10楼2010-11-12 08:02:45
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
dhd997(金币+3):热心鼓励。 2010-11-12 10:07:06
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-11-23 08:38:17
图不是很清楚
拍个清楚地传上来看看吧
由你描述的来看
应该不是细菌
倒是像放线菌和一些真菌的特征，很不好处理的，就算处理了以后细胞也得很长时间才能缓过来
试试用PBS洗涤3-5次后用10倍量的PS和两性霉素B培养，每天观察，洗涤，换液（还是10倍量的PS和两性霉素B），直至污染被清除了为止。
确定没有污染后，可以逐步把抗生素浓度降下来吧
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11楼2010-11-12 09:07:29
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mxxinscu

禁虫 (小有名气)
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-11-23 08:38:46
本帖内容被屏蔽
12楼2010-11-21 22:58:48
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allengrass

新虫 (初入文坛)
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-11-25 19:33:06
我培养细胞的时候也经常遇到这个，师兄说是黑胶虫，把抗生素剂量加大也不管用。不过感觉这虫对细胞生长没有天大影响。

[ Last edited by allengrass on 2010-11-23 at 11:43 ]
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13楼2010-11-23 11:41:11
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allengrass

新虫 (初入文坛)
我培养细胞的时候也经常遇到这个，师兄说是黑胶虫，把抗生素剂量加大也不管用。不过感觉这虫对细胞生长没有天大影响。
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14楼2010-11-23 11:42:41
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荷叶有风

金虫 (小有名气)
花雨林(金币+5):谢谢！ 2010-12-02 08:55:40
可能是细菌污染的问题，现在我们培养箱里面好像也有污染，进行了彻底消毒，但是还是有污染，怀疑是血清的问题。
也有可能是黑胶虫污染，因为我们一起培养的，就有几瓶污染了，其他的都是好的
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15楼2010-11-29 20:28:00
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lthy888888

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可能是支原体污染。
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16楼2011-08-23 21:01:57
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gu2006122116

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可能是黑胶虫，重新培养最好
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17楼2011-09-03 09:29:01
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piaoying_jys

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
很明显是黑胶虫，这种东西很恶心，去不掉的，扔了吧
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18楼2012-10-24 09:47:07
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448935271

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先将污染物用选择性培养基做一下鉴定究竟是真菌污染还是细菌污染，再用相应的抗生素处理一下，不过很多只能起到抑制作用，实在不行你只能把细胞都扔了，对大环境进行一次彻底清洁了
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19楼2012-10-24 09:53:38
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徽徽熊

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在养原代细胞，也出现楼主说的问题，之前用同一批培养基和血清养的其它细胞都不会出现这样的问题，会不会是原代细胞的问题呢？（我养的原代细胞是自己从猪的骨髓中分离的）
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20楼2013-03-23 13:01:31
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