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银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】测序问题请教，希望大家给予帮助！谢谢

各位虫友们，我想请问大家:
我最近克隆了一段基因序列，连19T-载体后，送测序（测通），比对结果发现在合成的引物部位缺少两个碱基，其他序列都正确。我不知道是引物合成的时候公司给合成错了还是测序的时候他们测的不准确？希望大家给予意见。谢谢大家了！

1楼 2010-11-02 16:39:26

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木虫 (小有名气)

樱花骑士

★
guojingya(金币+6): 2010-11-02 19:04:54
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-02 23:30:25

出错的序列是否有复杂结构。比如发夹？
如有发夹应在测序的时候备注。
出错的序列是否离测序引物较近？
大家都知道测序引物较近的序列不容易测出来。或者可以重新设计个远一点测序引物
合成引物的单子拿出来看一下，当时是否有填错？
你测了几个？
如果只测了一个，那建议你再测两三个。
祝好

未来天空才是极限

2楼2010-11-02 17:46:26

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银虫 (初入文坛)

非常感谢你的回答。我是直接连的pMD-19T载体，他们用通用引物测的序，我没有提供引物。我想请问下，引物合成公司不会把引物序列合成错吧（他们给我引物合成单是正确的）。再次感谢你！

3楼2010-11-02 19:09:51

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新虫 (小有名气)

★
guojingya(金币+1):谢谢参与
guojingya(金币+5): 2010-11-03 09:38:28

我觉得你可以和测序公司的联系一下，问问他们是怎么回事。我用过pMD-19T载体，没有出现这种情况。

4楼2010-11-02 21:57:30

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