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zxd95

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR的怪现象 已有3人参与

前天我提取植物总RNA,跑胶后发现有基因组污染,反转录之后,使用特异性引物和Pfu进行PCR扩增,结果获得了该基因的cDNA(750bp)和基因组gDNA(1500bp)的亮条带,除此之外又发现了其他2条带,我认为可能是cDNA和gDNA的等位基因,割胶回收可能的cDNA等位基因(1100bp)和gDNA的等位基因(1600bp)2条带,并以他们为模板,使用Pfu和基因特异性引物进行PCR扩增,结果仅得到了750bp的片段。
为什么大约1100bp和1600bp的模板,扩增出来的竟是750bp的片段???
附图:

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追梦的人
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

海纳百川止于至善
2楼2011-04-25 15:51:58
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cyz20050505

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-29 23:56:19
要想确认,就割胶回收克隆测序就清楚了,非特异扩增的可能性比较大
3楼2011-04-29 23:51:17
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cyz20050505

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
昨天忘了说,还有可能是RNA可变剪切体,总之测序就清楚了
4楼2011-04-30 10:15:47
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毛花许地黄

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的也是这样,感觉找不出问题,你的问题解决了么?
5楼2017-10-17 22:03:47
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