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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】一个真菌同源重组的问题,纠结了好几天了

小弟前一段时间做了一个真菌的同源重组的实验
检测到目的抗性片段已经插入位点了
然后就把改造菌种-70保存了

悲剧的事情发生了。。。

过段时间拿出来做抗性检测发现抗性居然消失了
这是怎么一回事啊
有人说是回复突变了
这种小概率的事怎么就让我给碰上了呢

请教版里各位高人的见解
最好给小弟一点意见
谢过先
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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by geminiww at 2010-10-28 11:08:40:
怎么检测到的目的抗性片段已经插入位点了?
我觉得要是单纯做的抗性实验的话,有可能抗性基因没有接上,只是共同存在,保存后可能分离了,丢失了,毕竟回复突变几率不大啊。。
本科学过,见笑了~

对获得的抗性克隆进行了PCR,条带摆在那儿啊
10楼2010-10-28 13:52:28
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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-10-28 11:48:31:
如何鉴定的插入

southern?

抗性克隆进行PCR
11楼2010-10-28 13:54:20
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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wgf1115 at 2010-10-28 12:59:53:
抗性质粒保存了吗?可以重新转化下。菌种相对容易把外源物质丢失的。保存体系中含有抗性抗生素吧?

有的
12楼2010-10-28 13:57:48
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