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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】非变性聚丙烯酰胺电泳 已有8人参与

我是新手做非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验,1)配制分离胶和浓缩胶的浓度是怎样的?
2)我要做凝胶的正交实验,选出同工酶酶带最好的分离胶和浓缩胶浓度,应该怎样设计,各成分的体积需要多少?
谢谢!
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biodadiao

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
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看天(金币+2):热心 2010-10-22 13:05:14
不管是变性还是非变性,浓缩胶的浓度都是确定的,按照protocol就可以。
分离胶的浓度要根据你的目标条带大小而确定。

配置非变性最重要的是,所有用到SDS的地方都要用DTT代替,电泳时尽管选用低温下进行,最好是4度,电压一般可以低些。
考虑到未聚合的丙烯酰胺单体对蛋白造成的失活,可以采用过夜预电泳。
9楼2010-10-13 22:21:30
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sweetbobo

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个配溶液最好去找你们学校的学生物的专业,新手最好要有人带着做试验,不然很绕弯
2楼2010-10-10 14:03:23
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hjxbjc

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
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看天(金币+2):鼓励新人回答 2010-10-22 13:04:55
从网上搜索一些。如果没有人问的话可以尝试的做一下。我当时也是白手起家,自己琢磨的。大概1个月才摸索出门道。我以前做过非变性的分离牛奶蛋白。
奔波在乳酸菌世界里的一只蜗牛——吃辣椒ing!!!
3楼2010-10-10 14:29:12
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
好好查阅文献,好哈的设计实验方案,这是很重要滴~
4楼2010-10-10 14:42:57
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