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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】非变性聚丙烯酰胺电泳
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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】非变性聚丙烯酰胺电泳 已有8人参与

我是新手做非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，1）配制分离胶和浓缩胶的浓度是怎样的？
2）我要做凝胶的正交实验，选出同工酶酶带最好的分离胶和浓缩胶浓度，应该怎样设计，各成分的体积需要多少？
谢谢！
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1楼 2010-10-10 13:22:37
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biodadiao

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
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看天(金币+2):热心 2010-10-22 13:05:14
不管是变性还是非变性，浓缩胶的浓度都是确定的，按照protocol就可以。
分离胶的浓度要根据你的目标条带大小而确定。

配置非变性最重要的是，所有用到SDS的地方都要用DTT代替，电泳时尽管选用低温下进行，最好是4度，电压一般可以低些。
考虑到未聚合的丙烯酰胺单体对蛋白造成的失活，可以采用过夜预电泳。
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9楼2010-10-13 22:21:30
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sweetbobo

银虫 (小有名气)
★
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这个配溶液最好去找你们学校的学生物的专业，新手最好要有人带着做试验，不然很绕弯
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2楼2010-10-10 14:03:23
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hjxbjc

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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看天(金币+2):鼓励新人回答 2010-10-22 13:04:55
从网上搜索一些。如果没有人问的话可以尝试的做一下。我当时也是白手起家，自己琢磨的。大概1个月才摸索出门道。我以前做过非变性的分离牛奶蛋白。
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奔波在乳酸菌世界里的一只蜗牛——吃辣椒ing！！！
3楼2010-10-10 14:29:12
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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好好查阅文献，好哈的设计实验方案，这是很重要滴~
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4楼2010-10-10 14:42:57
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