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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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slch007

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[交流] 【求助】用Reed-Muench method公式与Karbers公式计算的腺病毒TCID50滴度有区别吗?

疑问Reed-Muench method公式与Karbers公式计算的TCID50滴度有区别吗?)
以下病毒计算方法正确吗
腺病毒滴度测定方法:
TCID50
纯化前的腺病毒原液测一组,纯化后的腺病毒重复测三组。
(1)将293细胞消化计数,每孔种5*103个细胞,150ul的10%血清培养基,待细胞长满90%以上,可用。
(2)用无血清培养基每组将腺病毒稀释10^(-7),10^(-8),10^(-9),10^(-10), 10^(-11),10^(-12),10^(-13),10^(-14),八个梯度。
(3)将96孔板中每孔吸出120ul培养基,加入100ul稀释的腺病毒。(最终孔中的血清浓度约为2%)。留一排细胞不加病毒作为阴性对照。
(4)每个稀释度做8个孔的重复。以观察该孔是否出现CPE,确定该孔是否为阳性孔。假如某个梯度8个孔中共有5个阳性孔,则将该梯度的结果记为5/8,依次类推。
(5)整理原始数据,计算各稀释度的阳性率。
(6)最后按照Reed-Muench method公式计算病毒滴度。
(疑问Reed-Muench method公式与Karbers公式计算的TCID50滴度有区别吗?)
数据汇总:
病毒液滴定情况:
病毒名称        Ad-NEP
10^-10        8/8
10^-11        7/8
10^-12        3/8

病毒液滴度计算:( Ad-NEP)

Log of virus dilution        Infected test units        Cumulative
Infected(A)        Cumulative
Non-infected( B)        Ratio of
A/(A+B)        Percent
infected
-10        8/8        18        0        18/18        100
-11        7/8        10        1        10/11        90.9
-12        3/8        3        5        3/8        37.5
-13        0/8        0        8        0/8        0

计算过程:

Proportionate distance(Ad-NEP)=(0.909-0.5)/(0.909-0.375)=0.76
Log(ID50)=(-10)+(0.76*-1)= —10.76
则ID50=10^—10.76
则    Titer(Ad-NEP)=10*10^10.76 TCIDml-1=10^11.76 TCIDml-1
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