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slch007

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[交流] 【求助】用Reed-Muench method公式与Karbers公式计算的腺病毒TCID50滴度有区别吗？

疑问Reed-Muench method公式与Karbers公式计算的TCID50滴度有区别吗？）
以下病毒计算方法正确吗
腺病毒滴度测定方法：
TCID50
纯化前的腺病毒原液测一组，纯化后的腺病毒重复测三组。
（1）将293细胞消化计数，每孔种5*103个细胞，150ul的10%血清培养基，待细胞长满90%以上，可用。
（2）用无血清培养基每组将腺病毒稀释10^（-7）,10^（-8）,10^（-9）,10^（-10）, 10^(-11),10^（-12），10^（-13）,10^（-14）,八个梯度。
（3）将96孔板中每孔吸出120ul培养基，加入100ul稀释的腺病毒。（最终孔中的血清浓度约为2%）。留一排细胞不加病毒作为阴性对照。
（4）每个稀释度做8个孔的重复。以观察该孔是否出现CPE，确定该孔是否为阳性孔。假如某个梯度8个孔中共有5个阳性孔，则将该梯度的结果记为5/8,依次类推。
（5）整理原始数据，计算各稀释度的阳性率。
（6）最后按照Reed-Muench method公式计算病毒滴度。
（疑问Reed-Muench method公式与Karbers公式计算的TCID50滴度有区别吗？）
数据汇总：
病毒液滴定情况：
病毒名称 Ad-NEP
10^-10 8/8
10^-11 7/8
10^-12 3/8

病毒液滴度计算：（ Ad-NEP）

Log of virus dilution Infected test units Cumulative
Infected(A) Cumulative
Non-infected( B) Ratio of
A/(A+B) Percent
infected
-10 8/8 18 0 18/18 100
-11 7/8 10 1 10/11 90.9
-12 3/8 3 5 3/8 37.5
-13 0/8 0 8 0/8 0

计算过程：

Proportionate distance（Ad-NEP）=（0.909-0.5）/（0.909-0.375）=0.76
Log(ID50)=(-10)+(0.76*-1)= —10.76
则ID50=10^—10.76
则 Titer（Ad-NEP）=10*10^10.76 TCIDml-1=10^11.76 TCIDml-1
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1楼2010-10-09 12:01:58

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