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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞传代时怎么都吹不下来啊！
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞传代时怎么都吹不下来啊！已有5人参与

细胞刚从上海中科院买回来的时候每次要消化5min左右）（0.25%的胰酶—0.02%EDTA），而且要吹很多，但是最后还是有一些（少部分）细胞吹不下来哦！
传代多次或复苏的细胞就越不容易消化了啊，细胞都已经变圆变亮了，但终止消化后吹打却有很大一部分细胞吹不下来啊！每次只有等消化至细胞脱落了60%—70%的时候再终止消化才能把细胞吹下来哦？但每次消化这么久对细胞液不好，所以也不是个办法，希望各位高手能指点一二哦！
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1楼2010-10-09 00:32:38
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
看天(金币+1):热心 2010-10-10 20:19:44
richenim(金币+1): 2010-10-10 21:47:05
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2010-10-10 14:50:07:

哦，谢谢你哈！1ml枪我也试过，如果细胞没有消化到漂浮一半以上，就有很多都不会吹下来哦！

要不这样，试试把浮起来的细胞吸到一个皿中培养，仍贴壁的冲下来的细胞放另外一个皿培养。以后看看这两批细胞到底有没有区别，同时对你的实验处理因素反应如何。因为肿瘤细胞传代太多，就会老化，那些老的细胞就贴得很牢，而且反应性很差。其实那部分不要最好。
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10楼2010-10-10 16:02:34
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普通回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
richenim(金币+1): 2010-10-09 12:07:20
这是什么细胞呢？有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试，还是说这个细胞的特性就是如此呢？
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52187644
2楼2010-10-09 12:04:26
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richenim

金虫 (小有名气)
自己顶！
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3楼2010-10-09 12:04:59
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-10-09 12:04:26:
这是什么细胞呢？有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试，还是说这个细胞的特性就是如此呢？

是人前列腺癌细胞PC-3，尝试了更换培养瓶的啊，其他培养条件？是指什么？这个细胞确实是贴壁紧，不怎么好消化，但好像好不至于如此哦！
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4楼2010-10-09 12:07:12
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
ATCC介绍是说要消化5-15min哦，不过没有使唤过这种细胞，没有发言权哦。
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52187644
5楼2010-10-09 12:13:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢参与~ 2010-10-09 13:11:28
richenim(金币+2): 2010-10-09 20:39:06
有些细胞就是这样的啦
消化之前先用胰酶或者PBS洗掉表面残余的培养基
然后再加胰酶消化，放培养箱里面消化
差不多了再吹
也可以消化到快浮起来，加完全培养基中止
吹打其实对细胞也是很损的
像这类贴壁这么牢的细胞，对消化的耐受会比吹打的强
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6楼2010-10-09 12:50:09
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-09 12:50:09:
有些细胞就是这样的啦
消化之前先用胰酶或者PBS洗掉表面残余的培养基
然后再加胰酶消化，放培养箱里面消化
差不多了再吹
也可以消化到快浮起来，加完全培养基中止
吹打其实对细胞也是很损的
像这类贴壁这么 ...

我一般都是用PBS洗去残余的培养基然后再加胰酶消化的哦！它不是消化到快要浮起来，而是已经都浮起来了啊？这样对细胞的损伤会不会很大啊？而且我怕消化太久会有很多死细胞或碎片，所以每次将消化下来的细胞再离心30s左右，弃去含有胰酶的培养基再换上新的培养基培养哦，这样每次离心可不可以哦？
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7楼2010-10-09 20:43:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-09 23:33:08
richenim(金币+1): 2010-10-10 14:47:54
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2010-10-09 20:43:28:

我一般都是用PBS洗去残余的培养基然后再加胰酶消化的哦！它不是消化到快要浮起来，而是已经都浮起来了啊？这样对细胞的损伤会不会很大啊？而且我怕消化太久会有很多死细胞或碎片，所以每次将消化下来的细胞再离 ...

其实没有看到细胞的实际情况真的好难帮你分析
另外，用枪吹的力道会比滴管的大一点，如果你用滴管的话可以试试用1ml枪
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8楼2010-10-09 22:17:55
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-09 22:17:55:


其实没有看到细胞的实际情况真的好难帮你分析
另外，用枪吹的力道会比滴管的大一点，如果你用滴管的话可以试试用1ml枪

哦，谢谢你哈！1ml枪我也试过，如果细胞没有消化到漂浮一半以上，就有很多都不会吹下来哦！
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9楼2010-10-10 14:50:07
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