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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞传代时怎么都吹不下来啊! 已有5人参与

细胞刚从上海中科院买回来的时候每次要消化5min左右)(0.25%的胰酶—0.02%EDTA),而且要吹很多,但是最后还是有一些(少部分)细胞吹不下来哦!
传代多次或复苏的细胞就越不容易消化了啊,细胞都已经变圆变亮了,但终止消化后吹打却有很大一部分细胞吹不下来啊!每次只有等消化至细胞脱落了60%—70%的时候再终止消化才能把细胞吹下来哦?但每次消化这么久对细胞液不好,所以也不是个办法,希望各位高手能指点一二哦!
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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-09 12:50:09:
有些细胞就是这样的啦
消化之前先用胰酶或者PBS洗掉表面残余的培养基
然后再加胰酶消化,放培养箱里面消化
差不多了再吹
也可以消化到快浮起来,加完全培养基中止
吹打其实对细胞也是很损的
像这类贴壁这么 ...

我一般都是用PBS洗去残余的培养基然后再加胰酶消化的哦!它不是消化到快要浮起来,而是已经都浮起来了啊?这样对细胞的损伤会不会很大啊?而且我怕消化太久会有很多死细胞或碎片,所以每次将消化下来的细胞再离心30s左右,弃去含有胰酶的培养基再换上新的培养基培养哦,这样每次离心可不可以哦?
7楼2010-10-09 20:43:28
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查看全部 24 个回答

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

richenim(金币+1): 2010-10-09 12:07:20
这是什么细胞呢?有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试,还是说这个细胞的特性就是如此呢?
52187644
2楼2010-10-09 12:04:26
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richenim

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-10-09 12:04:26:
这是什么细胞呢?有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试,还是说这个细胞的特性就是如此呢?

是人前列腺癌细胞PC-3,尝试了更换培养瓶的啊,其他培养条件?是指什么?这个细胞确实是贴壁紧,不怎么好消化,但好像好不至于如此哦!
4楼2010-10-09 12:07:12
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

ATCC介绍是说要消化5-15min哦,不过没有使唤过这种细胞,没有发言权哦。
52187644
5楼2010-10-09 12:13:12
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