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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细胞传代时怎么都吹不下来啊！
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richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞传代时怎么都吹不下来啊！ 已有5人参与

细胞刚从上海中科院买回来的时候每次要消化5min左右）（0.25%的胰酶—0.02%EDTA），而且要吹很多，但是最后还是有一些（少部分）细胞吹不下来哦！
传代多次或复苏的细胞就越不容易消化了啊，细胞都已经变圆变亮了，但终止消化后吹打却有很大一部分细胞吹不下来啊！每次只有等消化至细胞脱落了60%—70%的时候再终止消化才能把细胞吹下来哦？但每次消化这么久对细胞液不好，所以也不是个办法，希望各位高手能指点一二哦！
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1楼 2010-10-09 00:32:38
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richenim

金虫 (小有名气)
自己顶！
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3楼2010-10-09 12:04:59
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-10-09 12:04:26:
这是什么细胞呢？有没有尝试更换下细胞瓶或其他培养条件试试，还是说这个细胞的特性就是如此呢？

是人前列腺癌细胞PC-3，尝试了更换培养瓶的啊，其他培养条件？是指什么？这个细胞确实是贴壁紧，不怎么好消化，但好像好不至于如此哦！
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4楼2010-10-09 12:07:12
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-09 12:50:09:
有些细胞就是这样的啦
消化之前先用胰酶或者PBS洗掉表面残余的培养基
然后再加胰酶消化，放培养箱里面消化
差不多了再吹
也可以消化到快浮起来，加完全培养基中止
吹打其实对细胞也是很损的
像这类贴壁这么 ...

我一般都是用PBS洗去残余的培养基然后再加胰酶消化的哦！它不是消化到快要浮起来，而是已经都浮起来了啊？这样对细胞的损伤会不会很大啊？而且我怕消化太久会有很多死细胞或碎片，所以每次将消化下来的细胞再离心30s左右，弃去含有胰酶的培养基再换上新的培养基培养哦，这样每次离心可不可以哦？
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7楼2010-10-09 20:43:28
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-09 22:17:55:


其实没有看到细胞的实际情况真的好难帮你分析
另外，用枪吹的力道会比滴管的大一点，如果你用滴管的话可以试试用1ml枪

哦，谢谢你哈！1ml枪我也试过，如果细胞没有消化到漂浮一半以上，就有很多都不会吹下来哦！
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9楼2010-10-10 14:50:07
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-10 16:02:34:


要不这样，试试把浮起来的细胞吸到一个皿中培养，仍贴壁的冲下来的细胞放另外一个皿培养。以后看看这两批细胞到底有没有区别，同时对你的实验处理因素反应如何。因为肿瘤细胞传代太多，就会老化，那些老的细胞 ...

恩，好的，我试试你给的建议，谢谢了。
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11楼2010-10-10 21:47:48
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richenim

金虫 (小有名气)
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Originally posted by 我本兽医 at 2010-10-10 23:02:35:
对于这种比较难消化的细胞，个人认为消化的时间长一点，问题不大。楼主考虑的对，消化时间过长，的确影响细胞的生长状态。但是，这种细胞的理化特性已经如此了，也只能忍了。如果你觉得大量胰酶+长时间的消化不好 ...

谢谢了，这种方法我也试过，等细胞之间有间隙的时候，其实还是有少量的细胞漂浮着，我就把胰酶弃去了，再继续消化，实在是难消化啊，就只有再加胰酶哦！呵呵。。。
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17楼2010-10-11 12:25:09
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richenim

金虫 (小有名气)
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Originally posted by vivit1986 at 2010-10-11 11:14:10:
吹不下来，可能是手法问题，问问你周围的朋友，看他们是怎么吹的，还有就是在吹的时候确实有一部分细胞是吹不下来的，如果不是太多，其实也没多大问题，反正我传细胞的时候也是会有一些细胞在上面的。

我做细胞都一年多了啊，我养了三种细胞的，就只有这种细胞不好吹哦，应该不是手法的问题吧，呵呵。。。它吹不下来的是占大部分哦！
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18楼2010-10-11 12:26:31
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by alxz at 2010-10-11 11:52:21:

这个起码值5个金币吧……
我们老师都不让我们传给其他课题组学生的
哈哈

3个够不够啊？等我试了，有效果再给你30个吧，呵呵。。。。
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19楼2010-10-11 12:28:13
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richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by alxz at 2010-10-11 11:41:47:
不终止消化，直接吹打
吹打完了再终止消化
这样会把细胞打得很均匀

“不终止消化，直接吹打”是指细胞变圆变亮了就用培养瓶里德胰酶吹打吗？
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21楼2010-10-11 12:41:08
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