| 查看: 4899 | 回复: 2 | |||
pumpkin236铁虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】NIH3T3细胞培养 已有2人参与
|
|
最近老板让养NIH3T3细胞，就找熟人复苏了一瓶NIH3T3细胞，但是关于该细胞的性质不是很清楚。该熟人是用胎牛血清养的，而我再ATCC上看的描述是禁止用胎牛血清，最好用小牛血清。。。所以比较疑惑。。。 还有几个问题 1消化传代时胰酶的用量，以及消化到什么程度就可以终止消化（0.25%胰酶-0.02%EDTA） 2消化后是直接吸走胰酶直接加培养基吹打，然后分装。还是吹打后还要离心，然后再加培养基分装呢 3接种密度是多少？昨天我加入2ml的培养基吹打，然后接种了500微升到新培养瓶中，但是发现长的比较慢 3NIH3T3细胞到底什么状态才算状态好啊 急求各位用经验的高手指教下 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细胞培养中的问题
已经有11人回复
- 【课件】细胞培养的基本条件--教你如何创建细胞室
已经有102人回复
- 细胞培养相关问题 急！！！！！
已经有13人回复
- SIRNA
已经有34人回复
- 细胞培养求助
已经有5人回复
- 【求助/交流】细胞培养污染问题
已经有19人回复
- 【其他】关于细胞培养的问题，有养细胞的TX们快进
已经有14人回复
- 【求助/交流】关于细胞不贴壁的问题
已经有5人回复
- 【分享】细胞培养技术个人总结1
已经有47人回复
- 【原创】细胞培养技术自己的总结
已经有51人回复
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+5):好热心啊~赞~ 2010-09-17 17:00:33
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+5):好热心啊~赞~ 2010-09-17 17:00:33
|
你好。之所以用小牛血清，ATCC也讲得很清楚，胎牛血清成分较小牛更多，有些因子会影响3T3细胞的正常生长或者引起变异。时间太久，我记得不太清楚了，你可以查一下。不过一开始我也是用胎牛养的，后来看了说明书就赶紧改用了。 总之我这么折腾过后也没什么大变化，还比较正常。这个细胞挺好养的，跟平时养的贴壁细胞没啥区别。T25的瓶，长80%-90%传代，用gibico或者sigma的商品化胰酶0.5-1ml都可以，时间长短。镜检看到细胞都变圆了，就终止。不镜检么就在操作台灯下观察，轻微倾斜细胞瓶时，贴壁细胞开始有沙状脱落就可以开始终止了。我是直接加培养液终止吹打的。你的胰酶配方跟我一样，所以吹打完建议离个心，因为有EDTA。不离心也可以，就是细胞会贴壁会越来越不牢。接种密度，就一传三没有什么问题，长得还比较快，密度高些么长得确实快些，它也有群体效应。至于3T3细胞什么状态算好，一是形态要对，可以跟ATCC上的图作对比，二是看细胞消化下来是否透亮，贴壁时边缘是否清晰，三是贴壁算不算牢，四是生长速度跟ATCC说明是否一致，这些很多都是靠经验，久了自然明白。如果还不能确定，那就拿个敏感药物检测下它的敏感性。 多养养，自然它就适应新环境了。除非本身种不好，你是从别人那里拿来的，这个很不好说，传了多少代了，还保不保持原有的特性，对你的实验有没有影响，这些都是个问号。如果项目真的很重要，就去ATCC买，不要抱侥幸心理，如果没那么讲究，那就将就用吧。 |
2楼2010-09-17 12:26:22
pumpkin236
铁虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 2.7
- 散金: 45
- 红花: 2
- 帖子: 281
- 在线: 136.4小时
- 虫号: 433783
- 注册: 2007-08-18
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
3楼2010-09-18 10:20:12
