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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】抗性筛选的问题
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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】抗性筛选的问题 已有3人参与

我在将一段抗性基因转入到菌落的DNA中，在抗性鉴别的时候遇到问题了：
在普通平板上沃我的菌长的挺不错了，但在抗性平板上长势明显不行。
请问这种情况能不能算成功转入进去啊？
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1楼 2010-09-13 10:48:34
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
九月的雨天(金币+1):谢谢参与
需要做抗性的浓度梯度
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2楼2010-09-13 12:14:06
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
九月的雨天(金币+1):谢谢参与
做梯度筛选
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3楼2010-09-13 12:42:51
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zwlr116812

金虫 (正式写手)
★
九月的雨天(金币+1):谢谢参与
先做浓度逐级筛选，然后做遗传稳定性测试，达到100%，再进行转化，要注意抗性丢失问题
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4楼2010-09-21 21:36:22
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)
★
九月的雨天(金币+1):谢谢参与
算是吧。是携带质粒吗？如果是，就很正常了！质粒虽然能够赋予菌体抗性，但同样会增加其生长的负担！
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Nothingisimpossible!
5楼2010-10-08 19:50:06
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★
九月的雨天(金币+1):谢谢参与
如楼上几位所说，抗性基因转入后需要检测抗性浓度梯度，如果在常规浓度下生长的也不良好，那这种抗性意义就不大了
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6楼2010-10-08 20:07:19
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)
抗性基因转到菌落DNA中？这是什么意思呢？是质粒转的，还是整合到基因组DNA上了呢？
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7楼2010-10-08 23:41:58
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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by wish0310 at 2010-10-08 23:41:58:
抗性基因转到菌落DNA中？这是什么意思呢？是质粒转的，还是整合到基因组DNA上了呢？

自己构建质粒转进去的
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8楼2010-10-28 14:08:00
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zwlr116812 at 2010-09-21 21:36:22
先做浓度逐级筛选，然后做遗传稳定性测试，达到100%，再进行转化，要注意抗性丢失问题

请问能说下具体的步骤么？我最近在做一个质粒转入酵母，但是抗性浓度一直不知道怎么确定，还有在平板上与在液体培养基中的抗性浓度一般是一样的么？多谢啦
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9楼2013-06-11 20:28:03
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