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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】抗性筛选的问题 已有3人参与

我在将一段抗性基因转入到菌落的DNA中,在抗性鉴别的时候遇到问题了:
在普通平板上沃我的菌长的挺不错了,但在抗性平板上长势明显不行。
请问这种情况能不能算成功转入进去啊?
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silicare

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九月的雨天(金币+1):谢谢参与
需要做抗性的浓度梯度
2楼2010-09-13 12:14:06
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violet.zhou

木虫 (小有名气)


九月的雨天(金币+1):谢谢参与
做梯度筛选
3楼2010-09-13 12:42:51
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zwlr116812

金虫 (正式写手)


九月的雨天(金币+1):谢谢参与
先做浓度逐级筛选,然后做遗传稳定性测试,达到100%,再进行转化,要注意抗性丢失问题
4楼2010-09-21 21:36:22
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)


九月的雨天(金币+1):谢谢参与
算是吧。是携带质粒吗?如果是,就很正常了!质粒虽然能够赋予菌体抗性,但同样会增加其生长的负担!
Nothingisimpossible!
5楼2010-10-08 19:50:06
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怎么都行

银虫 (小有名气)


九月的雨天(金币+1):谢谢参与
如楼上几位所说,抗性基因转入后需要检测抗性浓度梯度,如果在常规浓度下生长的也不良好,那这种抗性意义就不大了
6楼2010-10-08 20:07:19
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wish0310

至尊木虫 (著名写手)

抗性基因转到菌落DNA中?这是什么意思呢?是质粒转的,还是整合到基因组DNA上了呢?
7楼2010-10-08 23:41:58
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九月的雨天

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by wish0310 at 2010-10-08 23:41:58:
抗性基因转到菌落DNA中?这是什么意思呢?是质粒转的,还是整合到基因组DNA上了呢?

自己构建质粒转进去的
8楼2010-10-28 14:08:00
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zwlr116812 at 2010-09-21 21:36:22
先做浓度逐级筛选,然后做遗传稳定性测试,达到100%,再进行转化,要注意抗性丢失问题

请问能说下具体的步骤么?我最近在做一个质粒转入酵母,但是抗性浓度一直不知道怎么确定,还有在平板上与在液体培养基中的抗性浓度一般是一样的么?多谢啦
9楼2013-06-11 20:28:03
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