应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
52/1返回列表
查看: 2657  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cheo163

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题

我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定我的鼠抗是不是阳性，不知道该怎么解决？


[ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 16:30 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-09-03 16:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lliu at 2010-09-09 10:51:47:


你的目的蛋白不是25Kd吗？

如果你选用的单抗是IgG， 那么结果阴性只能说明你提取的蛋白中根本没有目的蛋白，或者二抗失效。没有理由可解释抗鼠Fc二抗不和鼠IgG反应。

另，你可以选用抗鼠K chain二抗试试 ...

当然，因为我不确定自己要检测的抗体是阴性还是阳性，所以我用actin抗体作对照，它的大小是43kd。二抗选用G抗M（Fc）
结果是：加原来二抗的有43的带，但加Fc二抗的是空白
......
那个二抗是从别人那里拿来的，我再去验证一下是否失效好了。

[ Last edited by cheo163 on 2010-9-9 at 13:43 ]
赞一下 回复此楼
12楼2010-09-09 13:37:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+1):高人指点一下 2010-09-03 19:10:57
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-09-04 08:08:58
引用回帖:
Originally posted by cheo163 at 2010-09-03 16:28:21:
我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定 ...

什么叫鼠脑中的IgG的H和L chain也显示，鼠脑中有抗体么？你的表述是不是想说在你用鼠脑组织作WB的时候，为什么H和L chain也看得到？
赞一下(2人) 回复此楼
52187644
3楼2010-09-03 17:38:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-09-03 17:38:17:



什么叫鼠脑中的IgG的H和L chain也显示，鼠脑中有抗体么？你的表述是不是想说在你用鼠脑组织作WB的时候，为什么H和L chain也看得到？

对吧，就是这样，然后怎样才能不把那个H和L chain显色出来

[ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 20:45 ]
赞一下 回复此楼
4楼2010-09-03 20:40:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励一下！ 2010-09-03 21:54:54
而且小鼠还不是含有自身IgG，鼠脑中也有阿，制成组织lysis时，因为要煮，就把H和L chain分开了，加了抗鼠的二抗不就显色了~~
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-09-03 20:58:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭