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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
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cheo163

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题

我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定我的鼠抗是不是阳性，不知道该怎么解决？


[ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 16:30 ]
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1楼 2010-09-03 16:28:21
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lliu

新虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-09 16:55:23
引用回帖:
Originally posted by cheo163 at 2010-09-09 09:14:31:

这个方法不可行，实验结果显示rat-brain虽然屏蔽掉了rat-brain中25kd的L链，但我的目的带（actin 43kd）也没有了。

你的目的蛋白不是25Kd吗？

如果你选用的单抗是IgG， 那么结果阴性只能说明你提取的蛋白中根本没有目的蛋白，或者二抗失效。没有理由可解释抗鼠Fc二抗不和鼠IgG反应。

另，你可以选用抗鼠K chain二抗试试。如果和内源性IgG 交叉，位置在25Kd，与你的目的蛋白（43Kd）可以区别。
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11楼2010-09-09 10:51:47
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+1):高人指点一下 2010-09-03 19:10:57
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-09-04 08:08:58
引用回帖:
Originally posted by cheo163 at 2010-09-03 16:28:21:
我现在手上有一个需要鉴定的小鼠单抗，但是查资料显示这种蛋白只在鼠脑中表达，表达大小为25kd。但问题是我如果用鼠脑的组织样转膜做western，显色时鼠脑中的IgG轻重链也一起显示（大概55kd/25kd），就没办法确定 ...

什么叫鼠脑中的IgG的H和L chain也显示，鼠脑中有抗体么？你的表述是不是想说在你用鼠脑组织作WB的时候，为什么H和L chain也看得到？
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52187644
3楼2010-09-03 17:38:17
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cheo163

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-09-03 17:38:17:



什么叫鼠脑中的IgG的H和L chain也显示，鼠脑中有抗体么？你的表述是不是想说在你用鼠脑组织作WB的时候，为什么H和L chain也看得到？

对吧，就是这样，然后怎样才能不把那个H和L chain显色出来

[ Last edited by cheo163 on 2010-9-3 at 20:45 ]
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4楼2010-09-03 20:40:47
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cheo163

金虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励一下！ 2010-09-03 21:54:54
而且小鼠还不是含有自身IgG，鼠脑中也有阿，制成组织lysis时，因为要煮，就把H和L chain分开了，加了抗鼠的二抗不就显色了~~
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5楼2010-09-03 20:58:38
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