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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】16sRNA怎么提取？以及相关名词不太懂。求助！
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QQ84508540

捐助贵宾 (小有名气)

强迫症患者

[交流] 【求助/交流】16sRNA怎么提取？以及相关名词不太懂。求助！ 已有8人参与

各位虫友，我也是初涉这个领域，对16sRNA提取有很多不理解，虽然知道诸如PCR等知识的原理，但是在具体提取过程中，还是不太清楚其步骤，更没做过了，像使用的TE、PCR反应体系、TE一RNaseA、EBbuffe……等不太懂，还有构建引物是根据什么去做，或者选择，试剂盒是怎么回事，要想拿到公司去测序，我需要做到哪步后再送过去测序？

貌似问题有点弱弱的，但是真的不太懂，百度搜出来一大片，不如请虫友通俗的讲讲，谢谢帮忙。

要是有此类实验的具体步骤的课件或者实验设计，希望能给予分享，谢谢啦。

我需要做的菌种是一种芽孢杆菌，具体是什么类型还不清楚。

邮箱：84508540@163.com

[ Last edited by QQ84508540 on 2010-8-31 at 22:18 ]
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1楼 2010-08-31 22:16:33
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won7

金虫 (小有名气)
★ ★
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silicare(金币+1):非常正确 2010-09-01 08:16:04
感觉这位虫友对分子生物的知识和技术知之甚少，建议先看一点有关分子生物学的书再做，从基础开始。如果身边有人做分子生物学实验，最好向他们请教，这样事半功倍。在这里你一无了解，让人怎么教啊！
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2楼2010-08-31 22:31:45
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QQ84508540

捐助贵宾 (小有名气)

强迫症患者
引用回帖:
Originally posted by won7 at 2010-08-31 22:31:45:
感觉这位虫友对分子生物的知识和技术知之甚少，建议先看一点有关分子生物学的书再做，从基础开始。如果身边有人做分子生物学实验，最好向他们请教，这样事半功倍。在这里你一无了解，让人怎么教啊！

这个，呵呵，的确说的对哦~分子生物学学过点，的确知之甚少，做的更少了，现在涉及到这方面的了，着急呀~~哎……有没有类似实验的实验步骤什么的，自学应该还是很有信心的，谢谢你的帮助哦~
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3楼2010-09-01 00:31:17
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
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silicare(金币+1):非常好的idea~ 2010-09-01 08:16:24
去知网CNKI上找一些研博士的相关毕业论文，那些文章一般步骤讲的比较清楚
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4楼2010-09-01 07:41:17
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QQ84508540

捐助贵宾 (小有名气)

强迫症患者
引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-09-01 07:41:17:
去知网CNKI上找一些研博士的相关毕业论文，那些文章一般步骤讲的比较清楚

好的，谢谢提醒哦~嘿嘿

正在努力看
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5楼2010-09-01 10:34:12
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
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不明白提RNA跟PCR有什么关系啊，楼主要做什么啊？
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6楼2010-09-01 11:39:16
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QQ84508540

捐助贵宾 (小有名气)

强迫症患者
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-09-01 11:39:16:
不明白提RNA跟PCR有什么关系啊，楼主要做什么啊？

提取→扩增→测序→鉴定。
芽孢杆菌这样做能鉴定到种吗？
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7楼2010-09-01 11:42:32
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
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silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-01 12:15:18
引用回帖:
Originally posted by QQ84508540 at 2010-09-01 11:42:32:



提取、扩增、测序、鉴定。

你是要测序RNA对应的表达的DNA对吧，步骤应该是提取、反转、PCR、回收后测序鉴定。如果说测序RNA一般没有你这样的，一般是测序小RNA，这个东西提出来给公司测，大体过程就是加接头、反转、PCR、测序。
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8楼2010-09-01 11:46:03
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QQ84508540

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强迫症患者
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-09-01 11:46:03:

你是要测序RNA对应的表达的DNA对吧，步骤应该是提取、反转、PCR、回收后测序鉴定。如果说测序RNA一般没有你这样的，一般是测序小RNA，这个东西提出来给公司测，大体过程就是加接头、反转、PCR、测序。

嗯，是的测16sRNA即可，就是前面提取的实验步骤不太会，不知道该怎么做，从网上也没找到细菌的，只有酵母的，而且需要液氮，我这没有这个东东哦~只要做到扩增完然后拿去测序就行。
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9楼2010-09-01 11:56:47
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zhaoyu2881

木虫 (正式写手)
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Originally posted by QQ84508540 at 2010-09-01 11:42:32:



提取→扩增→测序→鉴定。
芽孢杆菌这样做能鉴定到种吗？

测序之后在NCBI里进行序列比对，选择合适的参比菌株，如果需要可以构建系统发育树，基本上都可以鉴定到种。祝楼主好运!
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Thatislife,onlylifehurts.
10楼2010-09-01 22:42:15
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