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【求助/交流】土壤微生物,PCR-DGGE细节如何操作?
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xujb32
银虫
(知名作家)
应助: 27
(小学生)
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帖子: 7915
在线: 137.5小时
虫号: 566200
注册: 2008-05-30
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学
[交流]
【求助/交流】土壤微生物,PCR-DGGE细节如何操作?
已有1人参与
自己在做土壤微生物多样性分析PCR-DGGE时,图谱不太理想。以下问题向大家请教?
1、制作梯度凝胶,胶凝固后,上端齿的地方,竖齿太矮(比正常缩短了),造成加样飘出。请问如何灌胶、凝固能使齿不萎缩?如何加样能使样品不漂出?
2、染色时用的银染,感觉条带太少,请问还有其他好的方法?
3、PCR扩增条带时,大家都是用的什么引物?
谢谢。
:):):):):):):):):):):):):):):):):):):):):):):)
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江湖笑笑生
1楼
2010-08-27 08:57:23
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xujb32
银虫
(知名作家)
1949stone:自己沙发 还纯表情 以后不要了啊 2010-08-27 09:11:35
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2楼
2010-08-27 08:58:04
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wallace974
木虫
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应助: 0
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虫号: 459784
注册: 2007-11-15
性别: GG
专业: 生物海洋学与海洋生物资源
★ ★
xujb32(金币
+4
):谢谢参与
silicare(金币+1):正解 2010-08-27 12:10:00
1、凝固的问题都有,换个长齿子,一般DGGE都给好几个梳子吧
2、银染分辨率是最高的了,你注意水一定要用双蒸水,含有杂质的水会导致银染失败
3、PCR引物一般要加GC夹子,给合成引物的公司说一声,他们都知道的
祝你实验顺利!
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万物一理,万法自然
3楼
2010-08-27 09:49:42
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silicare
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★
xujb32(金币
+4
):谢谢参与
比正常缩短了是什么意思
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4楼
2010-08-27 12:10:30
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木子勇夏
新虫
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注册: 2009-10-30
专业: 环境微生物学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我有时候也会,就是上面部分凝不起来似的,但是相同的条件下,我同时配两块胶,其一可凝,另一不凝,不知你的问题解决了没有?可否告知。
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5楼
2013-01-05 17:00:48
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