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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】土壤微生物，PCR-DGGE细节如何操作？
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xujb32

银虫 (知名作家)

[交流] 【求助/交流】土壤微生物，PCR-DGGE细节如何操作？ 已有1人参与

自己在做土壤微生物多样性分析PCR-DGGE时，图谱不太理想。以下问题向大家请教？
    1、制作梯度凝胶，胶凝固后，上端齿的地方，竖齿太矮（比正常缩短了），造成加样飘出。请问如何灌胶、凝固能使齿不萎缩？如何加样能使样品不漂出？
    2、染色时用的银染，感觉条带太少，请问还有其他好的方法？
    3、PCR扩增条带时，大家都是用的什么引物？
    谢谢。
:):):):):):):):):):):):):):):):):):):):):):):)
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江湖笑笑生
1楼 2010-08-27 08:57:23
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xujb32

银虫 (知名作家)
1949stone:自己沙发 还纯表情 以后不要了啊 2010-08-27 09:11:35
2楼2010-08-27 08:58:04
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wallace974

木虫 (小有名气)
★ ★
xujb32(金币+4):谢谢参与
silicare(金币+1):正解 2010-08-27 12:10:00
1、凝固的问题都有，换个长齿子，一般DGGE都给好几个梳子吧
2、银染分辨率是最高的了，你注意水一定要用双蒸水，含有杂质的水会导致银染失败
3、PCR引物一般要加GC夹子，给合成引物的公司说一声，他们都知道的
祝你实验顺利！
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万物一理，万法自然
3楼2010-08-27 09:49:42
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
xujb32(金币+4):谢谢参与
比正常缩短了是什么意思
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-08-27 12:10:30
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木子勇夏

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我有时候也会，就是上面部分凝不起来似的，但是相同的条件下，我同时配两块胶，其一可凝，另一不凝，不知你的问题解决了没有？可否告知。
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5楼2013-01-05 17:00:48
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