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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】100金币求助各位一个HPLC的具体问题。
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zff7673

银虫 (小有名气)
whynotbest(金币+1): 2010-08-27 16:03:30
你可以在反应液中加点标准品，确定那个是目标峰，流动相用缓冲盐试试看
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11楼2010-08-27 13:39:58
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
whynotbest(金币+1): 2010-08-27 16:03:34
不是超载，这两个峰其实就是一个，对映体不可能是的，就你这流动相条件不可能使对引体分叉，手性拆分也没那么容易，真是对映体的话这种峰3天就可以拆开，而且可以发非常好的杂志文章，但是明显不是对映体或异构体，

个人观点，这两个峰是一个峰，柱子不好，或者流动相条件不合适，或者溶剂效应，都会把好好的一个峰跑成这样，应该是一个东西
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
12楼2010-08-27 13:44:57
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cicilyok

新虫 (初入文坛)
whynotbest(金币+1): 2010-08-27 16:03:38
哇 图和我的好一样哦 不过之前我的是标准品跑出来全都是双峰 主要是柱效的原因 更改流动相比例以后有明显改善 样品还没有重新试过 不知道对你的实验是否有帮助 持续关注
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13楼2010-08-27 13:45:07
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883475

银虫 (小有名气)
whynotbest(金币+1): 2010-08-27 16:03:41
whynotbest(金币+4): 2010-08-27 16:07:00
楼主不是专业做研发分析的吧
首先，你的方法就是不成熟的，看你的流动相甲醇：水=65：35，进标品时主峰出峰时间7.8分钟，保留时间还是比较短的。
你可以走梯度：甲醇：水=15：85   0-5min
                                          80：20   20-35min
流速1.0ml/min
水相的pH可以调节一下，看你样品的性质，如果有酚羟基、羧基等酸性基团，可以用磷酸盐调节成pH3左右的buffer，如有碱性基团反之；

如果梯度洗脱后，图一中的两个峰荏苒没有明显的分离，那就真的要考虑是不是异构体之类的了，看你的产物结构中是否有烯的结构？是否有手性中心？
如果是烯的顺反异构的话，建议你换正相，用硅胶柱试试，当然，如果有手性柱的话，可以直接用手性柱来分离试试
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14楼2010-08-27 14:34:07
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jiusjiu

木虫 (正式写手)
whynotbest(金币+1): 2010-08-27 16:03:45
个人观点，如果流动相条件一样的话，那么第一个谱图两个峰不是一个物质，我想溶剂效应不会单单影响要检测的物质，这也太巧了。13楼上说的采用梯度或者换柱子就可以证明这个是不是溶剂效应造成的
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15楼2010-08-27 14:44:19
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sangezai

铜虫 (小有名气)
两个物质在里面
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16楼2010-08-27 16:05:15
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sangezai

铜虫 (小有名气)
whynotbest(金币+1): 2010-08-28 19:35:31
不好意思，说错了，没金币给的
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17楼2010-08-27 16:05:32
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
引用回帖:
Originally posted by 冰岛猎人 at 2010-08-27 13:37:06:
我的意思是你用的反应液造成的 你反应得到的母液如果没有提纯 直接进样就会发生溶剂效应  不知道你溶解标准品的溶剂和反应液中的溶剂是否一样

小弟确实是用没有经过任何处理的反应液直接进样的，会是溶剂效应吗？
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WorkFinishPublish
18楼2010-08-27 16:06:25
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
引用回帖:
Originally posted by 883475 at 2010-08-27 14:34:07:
楼主不是专业做研发分析的吧
首先，你的方法就是不成熟的，看你的流动相甲醇：水=65：35，进标品时主峰出峰时间7.8分钟，保留时间还是比较短的。
你可以走梯度：甲醇：水=15：85   0-5min
                    ...

谢谢这位兄台
小弟确实不是药分专业的，HPLC纯属外行，呵呵
那么多少保留时间是比较合适的呢
小弟的东西是钠盐，极性挺大的，溶剂是甲醇。
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WorkFinishPublish
19楼2010-08-27 16:11:00
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883475

银虫 (小有名气)
whynotbest(金币+1): 2010-08-28 19:35:42
引用回帖:
Originally posted by whynotbest at 2010-08-27 16:11:00:



谢谢这位兄台
小弟确实不是药分专业的，HPLC纯属外行，呵呵
那么多少保留时间是比较合适的呢
小弟的东西是钠盐，极性挺大的，溶剂是甲醇。

15-20分钟一般是比较合适的保留时间，当然也要看具体情况，如果保留时间长了以后峰展宽严重，那方法还是需要调整～
你说你的产物是钠盐，那水相最好还是用buffer吧，效果会好一些，看你贴的两张图，峰前峰后都不是很漂亮，方法改善的余地还很大

[ Last edited by 883475 on 2010-8-27 at 16:19 ]
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20楼2010-08-27 16:16:13
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