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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

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[交流] 【求助】100金币求助各位一个HPLC的具体问题。

情况是这样的：小弟在用HPLC研究一个反应的方法学，看看各种不同的条件下哪个产率高。所以对不同反应条件下的反应液进行了HPLC检测。之前，先对标准品进行了条件摸索，最后用甲醇：水=65:35，峰形还可以。
但是在对不同的反应液进行检测时出现一点问题。在其中几种反应条件下，发现反应液的目标峰形竟然呈现双峰，如下图：

最高的那个峰是目标峰。在用标准品进样时，可以确定是一个单峰。而且在其他某些反应条件下，反应液也是一个单峰。如下图：

大家可以看到，对于某几组反应液，是很好的一个单峰。但是在某几组反应液进样时，就变成上述的双峰。

我的几个疑惑是：
1. 紫外吸收值很小，进样量也就30μL，应该不是超载吧。并且标准品都是单峰，吸收值比这个高得多，反应液没理由超载的。
2. 也不大可能是生成了其他与目标产物挨得很近的峰，因为我摸方法学的这个条件，只涉及到产率高低，不会因为条件不同生成其他东西的。

所以想问一下各位虫友，这样的情况怎么解释和处理呢？

[ Last edited by whynotbest on 2010-8-27 at 00:46 ]

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1楼 2010-08-27 00:43:17

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883475

银虫 (小有名气)

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whynotbest(金币+1): 2010-08-28 19:35:42

引用回帖:

Originally posted by whynotbest at 2010-08-27 16:11:00:

谢谢这位兄台
小弟确实不是药分专业的，HPLC纯属外行，呵呵
那么多少保留时间是比较合适的呢
小弟的东西是钠盐，极性挺大的，溶剂是甲醇。

15-20分钟一般是比较合适的保留时间，当然也要看具体情况，如果保留时间长了以后峰展宽严重，那方法还是需要调整～
你说你的产物是钠盐，那水相最好还是用buffer吧，效果会好一些，看你贴的两张图，峰前峰后都不是很漂亮，方法改善的余地还很大

[ Last edited by 883475 on 2010-8-27 at 16:19 ]