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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何做定点突变
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何做定点突变已有4人参与

比如我有一段序列(序列本身很长，只把需要做点突变附近的序列给大家)：CGAGGTCGAGAATTCTCACTACCCGGGGTCGACCTCGAGC，如何把序列中红色的C突变成T呢？
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
1楼2010-08-19 11:34:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
看天(金币+2):鼓励 2010-08-21 01:21:28
空谷幽风(金币+1): 2010-08-21 15:40:58
如果已经构建在质粒上，可以通过设计突变引物扩增，然后使用Dpn I，切除野生型质粒。转化克隆菌株。

如果是线性的相对麻烦一些。需要同时设计突变点的突变引物和片段上下游的引物，两者搭配扩增，产生左右两端，然后使用近似重叠PCR的方法将两个片段连接起来。
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4楼2010-08-19 13:16:32
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普通回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
没人知道吗？自己顶!
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2010-08-19 11:57:13
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sabrina9786

木虫 (小有名气)
★ ★
看天(金币+2):鼓励回答 2010-08-21 01:21:20
空谷幽风(金币+1): 2010-08-21 15:40:39
这个很简单啊，你只要设计包括突变位点的重叠引物，然后结合上下游引物扩出两边片段，再分别回收左右两端，然后放在一起进行PCR就可得到全长的带有突变位点的基因。

当然不知道你说的序列很长是不是不容易扩出全长？
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zszhxmc
3楼2010-08-19 12:49:37
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xpp666666

铁虫 (小有名气)
★
看天(金币+1):鼓励 2010-08-21 01:21:37
空谷幽风(金币+1): 2010-08-21 15:41:03
赛百盛的点突变试剂盒 ，拿来用一下就搞定了 还挺好用的
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5楼2010-08-19 13:17:21
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)

Always Keep The Faith！
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-21 01:21:46
空谷幽风(金币+1): 2010-08-21 15:41:15
呵呵 有钱的话 买stratagene吧
做了n个突变的人飘过~

ps：赞一个4楼，没错，就是这样

[ Last edited by 米菲的旋律 on 2010-8-19 at 16:58 ]
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物必先腐而后虫生
6楼2010-08-19 14:37:12
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cqyniu

金虫 (小有名气)
重叠PCR很容易
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7楼2010-08-19 15:08:09
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
空谷幽风(金币+1): 2010-08-21 15:41:43
搭桥PCR
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8楼2010-08-20 20:17:22
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lidianrong2

新虫 (初入文坛)
★
看天(金币+1):鼓励新人回答 2010-08-21 01:22:00
赛百盛的点突变试剂盒 ，刚用过，喝好
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9楼2010-08-20 20:39:52
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pidou

木虫 (正式写手)
★
看天(金币+1):鼓励一下 2010-08-21 01:22:18
空谷幽风(金币+1): 2010-08-21 15:41:28
用全式金的试剂盒就可以，很便宜，具体方法，试剂盒说明书上有，半个小时应该就能搞定了
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10楼2010-08-21 00:01:57
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