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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-11-06 09:38:19
引用回帖:
Originally posted by hnndpt at 2010-11-05 16:33:20:
RAPD-PCR loci showing decreased and increased intensities in tumor tissue DNA relative to control DNA indicate that loci have undergone allelic losses and gains, respectively



allelic losses  ...

decreased and increased intensities
变亮了，说明模板增多了，所以就是等位基因获得咯~~~就是DNA拷贝数增加
当然，这个是不大精确的判断
可以做个什么核型研究，看看到底是哪个座位有问题，然后再进一步研究
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161楼2010-11-06 00:03:23
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dhd997

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问一下，PI单染的时候。乙醇固定，要把细胞剧烈混匀吗？比如漩涡没事吧？
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
162楼2010-12-04 10:31:14
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-04 11:24:29
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 10:31:14:
请问一下，PI单染的时候。乙醇固定，要把细胞剧烈混匀吗？比如漩涡没事吧？

是做流式？
不行，要温柔，不然细胞会碎的~
加了乙醇，细胞就很脆弱很脆弱了
比如1.5ml的细胞悬液，我都是用200ul的中枪轻柔混匀的，这样做出来的曲线拟合得非常好，而且没有碎片峰
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163楼2010-12-04 11:22:28
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-04 11:22:28:


是做流式？
不行，要温柔，不然细胞会碎的~
加了乙醇，细胞就很脆弱很脆弱了
比如1.5ml的细胞悬液，我都是用200ul的中枪轻柔混匀的，这样做出来的曲线拟合得非常好，而且没有碎片峰

是流式。轻轻的能混匀吗？我感觉用自己的PBS清洗应该也可以吧，试剂盒的buffer太不够用了
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164楼2010-12-04 11:24:09
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-04 11:33:25
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 11:24:09:

是流式。轻轻的能混匀吗？我感觉用自己的PBS清洗应该也可以吧，试剂盒的buffer太不够用了

buffer？神马来的？

---------------我们实验室的protocol------------------

流式细胞术测细胞周期样品制备

1、        消化细胞，用完全培养基重悬，并用中枪充分吹打成单细胞悬液。
2、        1000~1500rpm离心5min，弃尽上清，加500ul PBS轻柔重悬。
3、        缓慢加入1.5ml无水乙醇，边加边摇匀。
4、        置4℃固定过夜。
5、        同法离心，去除乙醇。避光条件下加500ul PI染液重悬，移入流式管。
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165楼2010-12-04 11:27:49
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-04 11:27:49:


buffer？神马来的？

---------------我们实验室的protocol------------------

流式细胞术测细胞周期样品制备

1、        消化细胞，用完全培养基重悬，并用中枪充分吹打成单细胞悬液。
2、        1000~1500rpm离 ...

我晕，实验步骤超级不一样啊。我用的凯基的试剂盒。
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166楼2010-12-04 11:32:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
silicare(金币+2):你可以开一个流式的专贴 2010-12-08 12:35:00
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Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 11:32:35:

我晕，实验步骤超级不一样啊。我用的凯基的试剂盒。

我们都是自己配的，protocol也是经过优化的，做出来的图超级漂亮~不需要试剂盒
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167楼2010-12-04 11:36:09
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-04 11:36:09:


我们都是自己配的，protocol也是经过优化的，做出来的图超级漂亮~不需要试剂盒

你们加入500ul  PI是不是太恐怖了？我加5ul也还可以啊。
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168楼2010-12-04 11:38:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 11:38:13:

你们加入500ul  PI是不是太恐怖了？我加5ul也还可以啊。

那个500ul是稀释过的溶液，同时里头也含有RNase
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169楼2010-12-04 11:40:16
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-04 11:40:16:


那个500ul是稀释过的溶液，同时里头也含有RNase

那就是还得自己买PI与RNA酶喽。
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170楼2010-12-04 11:41:24
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