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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
看天(金币+1):呵呵 2010-12-04 22:56:05
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 11:41:24:

那就是还得自己买PI与RNA酶喽。

是的~用起来挺好的
而且这些PI还可以用于普通的细胞染色。所以一次我们配个200ml放冰箱，可以用很久
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171楼2010-12-04 12:37:44
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dhd997

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-04 12:37:44:


是的~用起来挺好的
而且这些PI还可以用于普通的细胞染色。所以一次我们配个200ml放冰箱，可以用很久

能说下具体怎么配的吗？借鉴一下，PI不就是染色吗
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
172楼2010-12-04 14:49:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 14:49:41:

能说下具体怎么配的吗？借鉴一下，PI不就是染色吗

这个我得去翻翻……忘记扔哪里去了
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173楼2010-12-04 17:56:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~ 2010-12-07 14:08:46
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-04 14:49:41:

能说下具体怎么配的吗？借鉴一下，PI不就是染色吗

PI染色工作液配方（溶剂为超纯水）：
PI        RNase A        柠檬酸钠        NaF        溶液总量
5mg        400KU        100mg        0.03g        100ml

工作液终浓度：
PI：50μg/ml
RNase A：4KU/ml
NaF：0.3mg/ml（防腐剂，可不加）
柠檬酸钠：1mg/ml



----------------------
嗯，找到了~我们实验室的protocol
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174楼2010-12-07 11:27:14
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dhd997

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引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-07 11:27:14:


PI染色工作液配方（溶剂为超纯水）：
PI        RNase A        柠檬酸钠        NaF        溶液总量
5mg        400KU        100mg        0.03g        100ml

工作液终浓度：
PI：50μg/ml
RNase A：4KU/ml
NaF：0.3mg/ml（防腐剂，可不加）
柠檬酸钠：1m ...

不太适合我。依旧谢过！
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175楼2010-12-07 14:54:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-12-07 14:54:01:

不太适合我。依旧谢过！

怎么会不适合？这不就是通用的么……
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176楼2010-12-07 17:38:26
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-07 17:38:26:


怎么会不适合？这不就是通用的么……

一言难尽
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
177楼2010-12-07 18:35:31
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
强人，请教一个问题：用primer express3设计的引物和把该引物BLAST出的TM值差别很大，有十多度。请问该如何是好？多谢~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
178楼2010-12-07 18:51:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):good 2010-12-20 21:40:51
引用回帖:
Originally posted by j2 at 2010-12-07 18:51:47:
强人，请教一个问题：用primer express3设计的引物和把该引物BLAST出的TM值差别很大，有十多度。请问该如何是好？多谢~

按引物合成单上，50mM Na+的Tm加上5~10度甚至更多即可
如果做实时定量，可以加多点，做克隆，加少点
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179楼2010-12-07 23:28:20
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-07 23:28:20:


按引物合成单上，50mM Na+的Tm加上5~10度甚至更多即可
如果做实时定量，可以加多点，做克隆，加少点

十方感谢！
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
180楼2010-12-08 11:44:11
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