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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与，小姑娘 2011-01-06 12:20:41
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 21:41:51:


小伙子，没搞清楚原理啊！！
载体和片段都去磷酸化了，T4怎么可能形成磷酸二酯键呢？片段不需要去磷酸化的

片段是磷酸化的啊！我上面有写磷酸化啊~
我不是小伙子( ⊙ o ⊙ )！
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191楼2010-12-30 21:56:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流，请尽快领奖。 2010-12-31 14:37:58
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-30 21:56:41:

片段是磷酸化的啊！我上面有写磷酸化啊~
我不是小伙子( ⊙ o ⊙ )！

哦，我看错了

那么试试下面的连接条件
4度连接过夜，保证能长出克隆来
我所有的短片段连接都这么做的，成功率100%
当然了，你的连接酶的活性要好~
短片段确实难连，过夜连接就没问题了
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192楼2010-12-30 22:08:51
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richenim

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 21:36:45:


多少钱就真忘记了……估计2k左右吧
其实，不管是什么东西，要首先在自己的模型中确认确实是线粒体通路的才往后坐
其实很简单，测一个Cas-9的活性就搞定了。细胞色素C什么的其实可以不用测，当然想结果丰富一 ...

测Cas-9的活性试用Cas-9活性检测试剂盒还是用West Bloting检测啊？
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193楼2010-12-30 22:41:22
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richenim

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 21:36:45:


多少钱就真忘记了……估计2k左右吧
其实，不管是什么东西，要首先在自己的模型中确认确实是线粒体通路的才往后坐
其实很简单，测一个Cas-9的活性就搞定了。细胞色素C什么的其实可以不用测，当然想结果丰富一 ...

再补充下碧云天的Caspase 9 活性检测试剂盒怎么样啊？因为我们经费有限，老板估计不会让买进口的哦！
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194楼2010-12-30 22:45:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
silicare(金币+1):谢谢分享 2011-01-06 12:20:24
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2010-12-30 22:45:19:

再补充下碧云天的Caspase 9 活性检测试剂盒怎么样啊？因为我们经费有限，老板估计不会让买进口的哦！

没试过……我们用promega的，试剂减半使用得到的读数都很高
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195楼2010-12-31 10:28:41
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 22:08:51:


哦，我看错了

那么试试下面的连接条件
4度连接过夜，保证能长出克隆来
我所有的短片段连接都这么做的，成功率100%
当然了，你的连接酶的活性要好~
短片段确实难连，过夜连接就没问题了

恩，好的，谢谢楼主！祝你新年快乐哦！
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196楼2011-01-01 09:53:14
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richenim

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
LZ，有个问题要请教哈哦！
用FCM分析细胞周期，但结果中分别出现一个二倍体的G0/G1期的峰，一个二倍体的G2/M期与四倍体的G0/G1期重叠峰，一个四倍体的G2/M期峰，为什么会这样啊？
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197楼2011-01-04 13:45:15
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2011-01-04 13:45:15:
LZ，有个问题要请教哈哦！
用FCM分析细胞周期，但结果中分别出现一个二倍体的G0/G1期的峰，一个二倍体的G2/M期与四倍体的G0/G1期重叠峰，一个四倍体的G2/M期峰，为什么会这样啊？

能不能上图……
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198楼2011-01-04 15:24:40
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richenim

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-04 15:24:40:


能不能上图……

LZ，不好意思哦，前两天没有交检测费，检测的老师不让考图片，今天才拿到报告图，用相机照的，麻烦LZ帮忙分析下哦，
软件分析出来的是 Diploid:20.06% Dip G1:16.32% at 48.23  Dip G2:8.00% at 94.44 Dip S:75.68%  G2/G1:1.96   %CV:6.13
Tetraploid:79.94%  An1 G1:89.18% at 94.44  An1 G2:4.25% at 185.24
An1 S: 6.58%  G2/G1:1.96   %CV:5.18  Di:1.96
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199楼2011-01-06 10:28:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2011-01-06 10:28:56:

LZ，不好意思哦，前两天没有交检测费，检测的老师不让考图片，今天才拿到报告图，用相机照的，麻烦LZ帮忙分析下哦，
软件分析出来的是 Diploid:20.06% Dip G1:16.32% at 48.23  Dip G2:8.00% at 94.44 Dip S:7 ...

晚点回复你。我在赶工做报告…………=v=
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200楼2011-01-06 11:53:39
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