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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖,我也来玩~~已有39人参与

省得天天翻帖子看啦,直接post到这里~~~

自我介绍一下,我本科4年专业为生物技术,由于是比较基础的学科,所以基本上许多生物学领域的都有接触。现在研转了医学院的药理学,不过对临床医学所知甚少~基础方面由于和生物学想通,所以还是能应付一点

擅长领域:
1、核酸操作:包括纯化、扩增、质粒构建等
2、miRNA、siRNA方面的理论和技术
3、细胞生物学方面的理论和实验,从培养到后续的实验。目前做凋亡,比较熟
4、肿瘤方面:从分子到动物水平理论和技术,临床的不熟……
5、一点点生物信息学的知识
6、简单数据分析,实验设计等案头工作
7、试剂、耗材选购,因为我跟厂商代理商打交道比较多
8、另外杂七杂八的:了解一些生化、微生物方面的
9、另有诡异的问题也希望能够和大家一起探讨



[ Last edited by 三磷酸腺苷 on 2010-8-10 at 12:17 ]
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richenim

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有两个问题要请教下LZ哦,
1、我去做流式,用长春新碱做阳性对照(10ppm,给药24h),但是结果测出来是我的药物的凋亡率不到1%,而且长春新碱的凋亡率才3%,检测的老师说细胞的状态很好,染料也染上了,我不知道问题出在哪里,可否给些指点?我在网上查到说细胞凋亡后在普通显微镜的高倍镜下观察会看到细胞空泡化,所谓的空泡化到底是啥样子哦?
2、流式做完后我想进一步做一些机理方面的,打算做凋亡通路的内源性途径,预计要做caspase-3,-9和Bcl-2,Bax四个指标,不知道这样设计合理不,还需要补充不?
183楼2010-12-30 00:12:51
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richenim

金虫 (小有名气)


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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 11:37:10:


第一个问题:
1、首先考查自己的模型是否已经建立好。通过染Hoechst,是否得到比较高的凋亡率(视野中,凋亡细胞/总细胞)
2、制备样品的时候是否注意规范的操作?比如:有没有收集上清中的凋亡细胞?用原培 ...

1. 之前用Hoechst染了的,凋亡率差不多30%左右吧,后来一直用的吖啶橙染色的。
2.收集了上清,消化时没有加EDTA哦,但没加BSA,检测的老师说不用加所以我就没加,样品制备应该没问题吧,检测的老师说样品几乎没什么碎片哦
3.是用Annexin V/PI法,我们这边都用的是凯基的试剂盒,效果还可以。我的试剂盒是7月份买的,检测时细胞的含量大约10的六次方,加了200ul  binding buffer,8ul Annexin V和5ul PI
4.请问你有没有细胞空泡状的图片啊?恕我愚笨,我实在是不知道哦!
5.我要做的是线粒体通路,我是选用了caspase-3,-9和Bcl-2,Bax四个指标,Bcl-2家装相关的蛋白,我查文献有的选了Bcl-2,Bax,Bcl-xL,Bak;有的选了Bcl-2,
Bax,Bad,Bid;我个人觉得是做了Bcl-2,Bax就没必要再做Bcl-xL,Bak了,LZ认为呢?
185楼2010-12-30 16:28:19
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richenim

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 17:13:45:


反正我们用凯基的就做不出来东西,可能是货物批次间不稳定吧…………

空泡的图片我没有……网上搜应该能搜到

凋亡通路不是你想做什么通路就做什么,要实事求是,看看在你的模型中到底是什么机制……

你说的那个进口的凋亡试剂盒多少钱啊?
我的先导化合物主要是线粒体凋亡通路,所以我自己合成的化合物想探讨线粒体凋亡通路机制哦
187楼2010-12-30 17:23:35
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richenim

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 21:36:45:


多少钱就真忘记了……估计2k左右吧
其实,不管是什么东西,要首先在自己的模型中确认确实是线粒体通路的才往后坐
其实很简单,测一个Cas-9的活性就搞定了。细胞色素C什么的其实可以不用测,当然想结果丰富一 ...

测Cas-9的活性试用Cas-9活性检测试剂盒还是用West Bloting检测啊?
193楼2010-12-30 22:41:22
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 21:36:45:


多少钱就真忘记了……估计2k左右吧
其实,不管是什么东西,要首先在自己的模型中确认确实是线粒体通路的才往后坐
其实很简单,测一个Cas-9的活性就搞定了。细胞色素C什么的其实可以不用测,当然想结果丰富一 ...

再补充下碧云天的Caspase 9 活性检测试剂盒怎么样啊?因为我们经费有限,老板估计不会让买进口的哦!
194楼2010-12-30 22:45:19
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richenim

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LZ,有个问题要请教哈哦!
用FCM分析细胞周期,但结果中分别出现一个二倍体的G0/G1期的峰,一个二倍体的G2/M期与四倍体的G0/G1期重叠峰,一个四倍体的G2/M期峰,为什么会这样啊?
197楼2011-01-04 13:45:15
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-04 15:24:40:


能不能上图……

LZ,不好意思哦,前两天没有交检测费,检测的老师不让考图片,今天才拿到报告图,用相机照的,麻烦LZ帮忙分析下哦,
软件分析出来的是 Diploid:20.06% Dip G1:16.32% at 48.23  Dip G2:8.00% at 94.44 Dip S:75.68%  G2/G1:1.96   %CV:6.13
Tetraploid:79.94%  An1 G1:89.18% at 94.44  An1 G2:4.25% at 185.24
An1 S: 6.58%  G2/G1:1.96   %CV:5.18  Di:1.96
199楼2011-01-06 10:28:56
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richenim

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-06 11:53:39:


晚点回复你。我在赶工做报告…………=v=

恩,好的哦,谢谢了哈!
201楼2011-01-06 13:28:48
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-06 11:53:39:


晚点回复你。我在赶工做报告…………=v=

楼上是不是太忙了没时间帮我解答哦
203楼2011-01-08 12:51:05
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-08 13:31:26:


最近实验室年会啊~我整天都在忙……
==b

另外就是那个图实在太小了,看不清楚……

哦,那LZ先忙哈,过两天我弄个清晰的图哈!
205楼2011-01-08 19:05:57
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