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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】-三磷酸腺苷-答疑专帖，我也来玩~~
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
1949stone(金币+3):够意思 2010-10-16 19:12:56
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-10-13 08:38:11:

增值，凋亡。

细胞增殖，假设没有凋亡发生，那么就应该好好用流式测下周期改变，看要研究周期的哪个部分
凋亡，分两块来看，一类是周期依赖的，一类是非周期依赖的

你做实验的话，最简单的，发现有所谓的viability的改变的话（MTT），就应该踩几个时间点去看下周期有没有明显的变化。同时也看看有没有细胞的死亡（Hoechst 33342/PI）
等这些明确了再计划后面的事情
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141楼2010-10-13 12:46:58
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-13 12:46:58:


细胞增殖，假设没有凋亡发生，那么就应该好好用流式测下周期改变，看要研究周期的哪个部分
凋亡，分两块来看，一类是周期依赖的，一类是非周期依赖的

你做实验的话，最简单的，发现有所谓的viability的改 ...

这些搞定了，再说。
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
142楼2010-10-13 13:00:10
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dhd997

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老大做过Caspase 9与3吗？有什么经验之谈吗？还有ladder。
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143楼2010-10-13 16:19:03
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2010-10-13 16:19:03:
老大做过Caspase 9与3吗？有什么经验之谈吗？还有ladder。

Cas-3、9用promega的荧光试剂盒
ladder不好做，试过一次，失败
反正有其他指标，所以我不做了
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144楼2010-10-13 17:39:58
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181587941

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-10-13 22:57:44
我想问一个问题，我们通过比赤酵母表达外源蛋白，但是硫酸铵无法沉淀，通过观察，有以下几个现象：
一，摇瓶培养可以沉淀下来，但是发酵罐发酵就不会沉淀。
二，硫酸铵浓度足够，甚至达到饱和都无法沉淀。
三，不要怀疑蛋白浓度不够，我们换乙醇沉淀方法后，发现蛋白浓度大的惊人，占了瓶子的三分之一高度。
四，加80%硫酸铵后，溶液变的很稠，就是不沉淀。
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145楼2010-10-13 21:11:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
scelab(金币+2):hoho 2010-10-13 22:57:39
引用回帖:
Originally posted by 181587941 at 2010-10-13 21:11:16:
我想问一个问题，我们通过比赤酵母表达外源蛋白，但是硫酸铵无法沉淀，通过观察，有以下几个现象：
一，摇瓶培养可以沉淀下来，但是发酵罐发酵就不会沉淀。
二，硫酸铵浓度足够，甚至达到饱和都无法沉淀。
三， ...

这个问题难倒我了，毕竟我不是做蛋白纯化的
提点建议吧
沉淀的时候温度如何？可以尝试提高到40℃以上，当然前提是蛋白不会变性
实在不行的话，用其他的方法沉淀吧~~
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146楼2010-10-13 21:19:29
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-13 17:39:58:


Cas-3、9用promega的荧光试剂盒
ladder不好做，试过一次，失败
反正有其他指标，所以我不做了

你做什么指标？
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
147楼2010-10-13 21:24:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by dhd997 at 2010-10-13 21:24:59:

你做什么指标？

Hoechst
Cas-3，9
Annexin V/PI
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148楼2010-10-13 21:39:05
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dhd997

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-13 21:39:05:


Hoechst
Cas-3，9
Annexin V/PI

3,9不是光度的吗？有经验之谈没？
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
149楼2010-10-13 21:40:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-10-13 21:44:37
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Originally posted by dhd997 at 2010-10-13 21:40:18:

3,9不是光度的吗？有经验之谈没？

换液换少点，比如60ul左右，等到实验当天，试剂就可以少加点了（比如只需50，推荐的是100，不过没差……），一个试剂盒当两个用

（那个检测试剂是要和培养基体积1:1加的）
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150楼2010-10-13 21:42:57
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